Transformación bacteriana

Flussdiagrammknoten

• TRANSFORMACIÓN BACTERIANA

• DIA 1

• DIA 2

• En un tubo eppendorf de 3 ml colocar alrededor de 200 µl de células competentes Escherichia coli  DH5α

• Adicione 20 µl del ADN a introducir en la bacteria

• Mezclar cuidadosamente por inmersion e incubar  en hielo por 20 min

• Dar un choque térmico incubando a 42°C, de 30 - 60 "

• Transferir inmediatamente a un baño de hielo por 10 min

• Adicionar 1 ml de medio LB liquido

• Incubar a 37 °C con agitación continua durante una hora

• Plaquear en medio LB sólido que contiene antibiotico de selección apropiado (Kanamicina)

• Cultivar las bacterias en caja de Petri, boca abajo, toda la noche, en incubadora a 37 °C

• Observar directamente los resultados en las cajas de Petri

• Determinar el número de unidades formadoras de colonia

• Unidades Formadoras de Colonia (UFC). Unidad formadora de colonia por centimetro cuadrado. Unidades formadoras  de colonia por ml.