Método de DNS

Flussdiagrammknoten

• a) Añadir a 6 tubos Eppendorf 100 µL de reactivo DNS.

• b) En otro tubo Eppendorf, agregar 950 µL de la solución de sacarosa a 30 g/L + 50 µL de la enzima a 3 mg/mL

• c) Inmediatamente después de mezclar la enzima con la solución de sacarosa, tomar una muestra de 100 µL

• d) Vaciar la muestra en uno de los 6 tubos Eppendorf que contiene 100 µL de DNS. Este tubo será el blanco o T0

• e) Después de mezclar la enzima con la solución de sacarosa, medir 30 segundos y nuevamente tomar una muestra de 100 µL

• f) Vaciar la muestra en otro de los 6 tubos Eppendorf que contiene 100 µL de DNS. Ese será el T1.

• g) Seguir midiendo el tiempo, ahora para 1 min,1.5 min, 2 min y 3 min después de que la reacción empezó.

• h) Vaciar cada muestra de 100 µLtomada en un tubo con 100 µL de DNS. Se tendrán T2, T3, T4 y T5.

• i) Llevar a ebullir los 6 tubos Eppendorf a baño María durante 5 minutos.

• j) Colocarlos en agua fría durante aproximadamente 5 min o hasta que se enfríen.

• k) Agregar 1 mL de agua destilada a cada tubo y vaciar el contenido en celdas.

• l) Leer las absorbancias de las muestras a 540 nm recordando que el T0 es el blanco y registrarlas.

• m) Almacenar en refrigeración a 4°C para su posterior uso.