Carotenos

Flussdiagrammknoten

• Inicio

• Pesamos las muestras (previamente trituradas)

• Añadimos 2mL de MeOH HPLC y 1,5mL de Tris-HCl

• Ver preparación del Tris-HCl

• Agitamos durante 5 minutos a 4ºC

• Añadimos 4mL de cloroformo

• Centrifugamos 10 minutos a 700 rpm

• Recuperamos la fase inferior

• Fase recupetrada

• Resto

• Matraz topáceo de fondo redondo 

• Repetimos la extracción  5 a 8 veces con 3mL de cloroformo

• Evaporamos el cloroformo con el rotavapor a 40ºC

• Basura

• El resto se disuelve en 3,6ml de MeOH de pureza HPLC

• Añadimos 400 uL de KOH al 60% y agitamos en atm. anóxica

• Se deja reposar en oscuridad toda la noche

• Calentamos a 50ºC durantre 20-30 minutos

• Trasvasamos a tubos de 15mL

• Limpiar matraces; 2mL de agua MiliQ, 2mL de solución A, 1mL de cloroformo y 4mL de sol. A

• Agitamos y recuperamos la fase superior. A 4ºC  y oscuridad

• Añadimos 2mL de sol.A, agitamos y pasamos la fase superior al Falcon

• Repetir hasta que la Sol. A sea incolora

• Medimos el volumen recuperado de manera precisa

• Y añadimos Sol.A hasta conseguir un volumen conocido

• Pinchamos en el UPLC

• Miramos su absorbancia (270-540nm)

• Fin