Extracción poliaminas

Flussdiagrammknoten

• INICIO

• Pesar 0,5 g de tejido triturado y congelado

• Añadir 2,5mL de HClO4 5%

• Vortex

• Añadir 10 uL de hexanodiamina a 100ppm

• Vortex

• Reposo 1 hora en hielo

• Centrifugar 20 minutos a 4500 rpm y a 4ºC

• Pasar el sobrenadante a un tubo Falcon nuevo

• Añadir 1,66mL de NaOH 2M

• Añadir 10 uL de cloruro de benzoílo

• Vortex

• Derivatizar: 20 minutos a Tº ambiente

• Añadir 3,33 mL  de NaCl saturado

• Vortex

• Añadir 2 mL de dietil-éter

• Vortex 1 minuto

• Dejar reposar 

• Extraer el sobrenadante a un tubo nuevo (vidrio)

• Eliminar el disolvente con flujo de N2

• Resuspender en 130 uL de metanol

• Filtrar

• Pasar a viales de vidrio de UPLC con inserto

• Pinchar 4 uL con el programa      30-50 % ACN 40ºC

• FIN