Hemaglutinación pasiva

Flussdiagrammknoten

• Método por el cual las particulas o células están recubiertas por antigenos con el fin de determinar la presencia de anticuerpos de una determinada patología  

• En este tipo de prueba las particulas son transportadoras del antigeno 

• ¿Que tipo de muestra se utiliza?

• Células sanguíneas (pollo, ave) Las células están sensibilizadas con un antígeno

• ¿Cual es el fin de la practica ?

• Determinar la presencia de anticuerpos  contra el Treponema Pallidum (sifilis).

• Procedimiento para la reacción

• 1. Preparación de materiales 

• Incluidos en el kit 

• Diluyente (diluye tanto controles y muestras)

• Control negativo y positivo

• No incluidos en el kit

• Eritrocitos (no sensibilizados, no tienen superficie el antígeno) sirven verificar el suero del px no tienen anticuerpos

• Los eritrocitos sensibilizados (tienen superficie antigeno treponema pallidum) detectar suero px anticuerpos contra el treponema pallidum

• Micropipeta  Tips para micropipeta 

• 2. Rotule la placa con el siguiente titulo (control positivo / negativo) 

• Placa para muestras 

• ¿que tipo de prueba se implementara?

• prueba semicuantitativa porque se trabajan diluciones. es decir si una muestra de suero es + entonces a esa muestra se le siguen haciendo diluciones para determinar el titulo ala que es reactiva.

• 3. Verifique que la micropipeta tenga la capácidad de servir 25 microlitros de diluyente 

• 4. servir el diluyente en todos los pocillos hasta una dilución tentativa, se sirve aproximadamente hasta una dilución 1/32

• Recomendación sirva primero el diluyente para así no tener contaminación con la muestra.

• tome en cuenta que Las diluciones en esta prueba son seriadas , es decir que de una dilución se realizan las demás diluciones

• 5. Se comenzara con una dilución 1 / 2 

• Recomendacio no generar burbujas ala hora de servir para que el reactivo quede al fondo de la placa 

• 6. servir los reactivos control comenzando con el control + y tomando 25 microlitros para depositarlo en los pocillos de la primera fila con la pipeta 

• 7. revolver bien el control y diluyente 

• A PARTIR DE AQUI YA SE PUEDEN REALIZAR LAS DILUCIONES

• 8. con la misma pipeta que ha servido el control positivo tomar una licota de 25 microlitros y la coloca en el siguiente pocillo que ya tiene 25 microlitros de diluyente + la licota que vamos a agregar y obtenemos una dilución 1 / 4

• 9. Tomamos una licota de 25 micro/l y la trasladamos al siguiente pocitllo para obtener una dilución 1/8

• 10. susecivamente repita el paso 9 para hacer as diluciones tanto de los controles como de las muestras. 

• AHORA YA REALIZADAS TODAS LAS DILUCIONES APARTIR DE 1/2 HASTA 1/28 PARA HACER UNA DILUCION TENTATIVA Y PODER COMPRBAR HASTA DONDE HACE REACCION EL SUERO DEL PACIETE 

• 11. servir la muestra de eritrocitos no sensibilizados servir en las primeras dos diluciones 1;2 y 1;4 tanto de controles y muestras

• 12-  Tomar 25 microlitros con la pipeta y los colocar la muestra en cada uno de los pocillos

• 13. Agitamos bien para que los eritrocitos se mezclen bien con el contenido de los pocillos

• Recomendacion cuidar de no contaminar tanto nuestro reactivo y pocillos que están cerca

• 14. servir los eritrocitos sensibilizados (tienen el antígeno). Se servirán desde la dilución 1/8 en adelante 

• 15. Revolver bien con pipeteo en cada una de las diluciones

• 16. Llevar a la incubadora y esperar 45 minutos , pero igual sera dependiendo la marca del kit que se utilizo ya que en algunos el tiempo puede ser de una hora o una hora y media dependiendo de lo que se quiera determinar

• 17. Dar lectura a los resultados estos se van a ver en caso de que si son muestras negativas o control negativo un sedimento de eritrocitos como boton que se deposita al fondo del pocito

• Si la muestra es positiva o el control positivo se observara como un manto en donde se verán todos los eritrocitos difuminados porque reaccionan los anticuerpos con los antígenos formando la malla y el manto eso es lo que hace que no se precipiten los eritrocitos quedando atrapados formando la malla/ manto.

• Captura+De+Pantalla+2021 09 08+190455 (binary/octet-stream)

• Fin del procedimiento 

• HEMAGLUTINACION INDIRECTA -PASIVA