Se requiere microscopio de campo claro para el examen microscópico de orina y otros fluidos
corporales hay que proporcionar Especial cuidado a este ya que se usa en una parte integral del
trabajo en el laboratorio y los microscopios con lentes de calidad son costosos la adquisición de un
microscopio adecuado es de suma importancia el entrenamiento adecuado en el uso y apropiado
mantenimiento y limpieza el microscopio es crucial para la maximización de su potencial el usuario
debe estar familiarizado con cada uno de los componentes del microscopio y su función así como los
procedimientos de ajuste y alineación adecuados
Microscopio de campo
claro
Un microscopio de campo claro produce una imagen ampliada de la muestra que aparecen oscura en
un fondo brillante o un microscopio de campo claro consta de un solo lente que se conoce como lupa
en el laboratorio clinico sin embargo los microscopios de campo claro compuestos predominan y
consisten en dos sistemas de lentes
El primer sistema de lentes localizado más cerca de la muestra es el objetivo montado de la boquilla el
objetivo produce la primera imagen ampliada y la dirige al segundo sistema de lentes el ocular
Si el ocular también determina el diámetro del campo de visión observado este diámetro se
establece por un defecto redondo del ocular y se indica mediante el número de campo asignado al
ocular los números de campo que predominan en los microscopios de laboratorio clínico típicamente
están en el rango de 18 a 26
El cuerpo o estructura del microscopio sirve para mantener a estos cuatro componentes básicos en su
lugar
1 tubo óptico con sus lentes oculares y objetivos
2 un porta objeto sobre el cual la muestra se coloca para su visualización
3 un condensador para enfocar la luz sobre la muestra y4 una fuente de iluminación
Ocular
Mientras algunos microscopios tiene un solo ocular los que se utilizan en la mayoría de los laboratorios
clínicos tienen dos oculares sin embargo cuando se utiliza un microscopio monocular siempre ver con
los dos ojos abiertos ayuda a reducir la vista cansada con el microscopio binocular los ajustes de los
oculares son necesarios para garantizar una visualización óptima
La distancia interpupilar de los tubos del ocular se ajusta simplemente deslizando los para juntarlos o
separados
El ente magnífica o reduce las letras ahora gire las gafas 45 grados si las letras cambian en un gitud y
ancho las gafas contienen corrección tórica y deben ser usadas cuando se usa el microscopio si las
letras no cambian las gafas tienen sólo corrección esférica y no necesitan ser usadas para trabajar en
microscopio
Los usuarios de gafas deben considerar mantener sus gafas a la hora de trabajar en el microscopio y
protectores de goma disponibles que se ajustan sobre los oculares para evitar arañazos en los lentes
las personas con correcciones esféricas miopía e hipermetropía pueden trabajar el microscopio sin sus
gafas
Platina mecánica
la platina mecánica está diseñada para mantener firme en su lugar la lámina para ser examinada la
platina tiene botones de ajuste convenientemente ubicados para mover la parte frontal deslizando
hacia atrás y de lado a lado
Al ver la lámina el usuario de la imagen de arriba hacia abajo
Mediante el registro de los valores de las escalas de vernier horizontal y vertical la lámina puede ser
removida y luego puede ser colocada de nuevo en el campo de visión idéntico y reexaminar se
CONDENSADOR
Se encuentra debajo de la platina mecánica Está compuesto de dos lentes
El propósito Es distribuir uniformemente y óptimamente el enfoque de luz desde la fuente de
iluminación sobre la muestra
El diafragma de apertura es usualmente un diafragma Iris compuesto de hojas de metal fino que pueden acostarse para
abrir y formar varios diámetros
El propósito del diafragma de apertura es controlar el ángulo de la luz de iluminación presentado a la muestra y al lente del
objetivo
Uno de los errores más comunes es usar el diafragma de apertura para reducir el brillo del campo de imagen al hacerlo la
resolución disminuye por el contrario el usuario debe disminuir la intensidad de la Fuente de la luz o colocar un filtro de
densidad neutra sobre la Fuente
Sistema de iluminación
La fuente de luz es una lámpara de tungsteno o tuxteno halógeno localizado en la base del microscopio
Esta lámpara menudo es fabricada específicamente para asegurar la alineación del filamento de la lámpara cuando una
bombilla requiere un cambio
Uno debe ajustarse a la intensidad de la luz bajando la intensidad de la lámpara o mediante la colocación de filtros de
densidad neutra sobre la Fuente
Los filtros se marcan para indicar la reducción hecha por ejemplo no densidad neutra de 25 permite que pase 75% de la luz
Objetivos
Son componente más importante del microscopio porque ellos producen la primera ampliación de la muestra
Se localizan sobre un puente giratorio sólo se usa un objetivo en un momento los objetivos se cambian fácilmente con una
simple rotación del puente sin embargo cada objetivo tiene una instancia de trabajo Es decir la distancia entre el objetivo
Y el cubreobjetos sobre la lámina
Un microscopio tiene botones de ajustes de foco grueso y fino el usuario puede enfocar el microscopio moviendo la platina
mecánica que sostiene la pieza de arriba abajo
Algunos objetivos son diseñados para usarse con cubreobjeto si se requiere un cubreobjeto su espesor está grabado sobre
el lente después de la longitud del tubo óptico
Los objetivos se corrigen para dos tipos de aberraciones cromáticas y esféricas la aberración cromática se presenta porque
diferentes longitudes de onda de la luz curva en diferentes ángulos después de pasar a través del lente
Los objetivos corregidos que traen los componentes rojo y azul de la luz blanca el mismo foco son llamados acromaticos y
no pueden tener una designación grabada sobre ellos
Los objetivos que traen La Luz Roja azul y verde a un foco común son denominados acromaticos y son identificados con la
inscripción apo
La primera característica que se denomina par se entere y relaciona la habilidad del lente de objetivo para retener el mismo
centro de fod cuando el usuario cambia de un objetivo a otro
La segunda característica denominada parfocal se refiere a la habilidad de los objetivos de permanecer en el foco
independiente del objetivo usado
Nunca usar el condensador y el diafragma de apertura para reducir el brillo de la imagen más bien disminuir la intensidad
de iluminación o usar filtros de densidad neutra
Número de Campos oculares
Los oculares junto con los lentes del objetivo realizan dos importantes funciones
1 el diámetro del campo de visión
El diámetro del f o v es determinado por un deflector redondo o un reborde interior de cada ocular y este valor numérico es
conocido como número de campo ocular
En otras palabras y una regla métrica fuera puesta en la Platino San el objetivo 1 x el diámetro del círculo de vista
observado cuando se mira a través de los oculares mediría 18 milímetros
Cuando se usa múltiples microscopio Simi laboratorio para el examen de sedimento urinario esto es de suma importancia
que es u f o v sea el mismo porque los componentes en sedimento clínicamente significativos que se reportan como el
número presente por campo de baja potencia por campo de alto poder
Desafortunadamente la mayoría de los fabricantes de microscopios no gravan el número de campo en el ocular y si es
necesario debe ser obtenido de la información de compra original midiendo el diámetro usando una regla y un objetivo
1 x o poniéndose en contacto con El fabricante
2 el total de ampliación de la muestra
Procedimiento de ajuste del
microscopio
Los microscopios clínicos hoy principalmente usan iluminación de kohler con ese tipo de iluminación
la imagen de la fuente de luz enfocada sobre el plano focal frontal de la lente condensadora el
diafragma de apertura por un condensador de lámpara localizado justo enfrente de la fuente de luz
El uso adecuado de este sistema de iluminación es tan importante como la selección de un microscopio y sus
objetivos
Fabricante suministran instrucciones con el microscopio que son claras y fáciles de seguir además en línea
están disponibles tutoriales interactivos que demuestran el rendimiento óptico mejorado de un microscopio
cuando se ajusta para alcanzar la iluminación de kohler
Es usuario debería revisar el ocular y los objetivos especialmente el objeto para aceite de inmersión para
asegurarse de estos estén limpios y libres de aceite y huellas dactilares
De forma rutinaria inspeccionar en microscopio y superficies ópticas antes de los ajustes se puede ahorrar
tiempo valioso en la configuración en microscopio y en resolución de problemas
En laboratorios en los cuales Todo el personal es el mismo microscopio inspeccionar antes ayuda identificar
personas quienes necesitan que se les recuerda apropiado cuidado
En laboratorios en los cuales Todo el personal es el mismo microscopio inspeccionar antes ayuda identificar
personas quienes necesitan que se les recuerda apropiado cuidado y mantenimiento
Cuidado y mantenimiento preventivo
El microscopio es un instrumento de precisión por lo tanto garantizar un rendimiento mecánico y óptico a lo
largo plazo requiere de Cuidado incluyendo la limpieza y mantenimiento
El polvo es probablemente el mayor causante de daño de los componentes mecánicos y ópticos del
microscopio
El uso de una cubierta de polvo para microscopio cuando éste no está en uso o colocándolo en un gabinete de
almacenamiento elimina la acumulación de polvo
El manejar el microscopio por ejemplo cuando le retiran de un gabinete almacenamiento cambia de área de
trabajo de usuario debe siempre llevarlos firmemente usando ambas manos y debe evitar movimientos
abruptos
Todas las superficies ópticas Deben estar limpiadas para proporcionar imágenes nítidas y brillantes debido a
que el revólver se el prota con la mano los objetivos están en peligro de mancharse con la grasa de la piel
En microscopista nunca deben ser grasa tejido fascial o tejido sin pelusa para limpiar las superficies ópticas
Después de usar el lente objetivo de inmersión en aceite microscopista debe remover el aceite
cuidadosamente usando un papel seco para el ente debe repetir este procedimiento usando un papel
humedecido con limpiador de lentes
El microscopio se debe almacenar los objetivos de aceite de mención secos porque el aceite dejado sobre la
superficie del ente puede perjudicar el rendimiento óptico de este
El oculares es particularmente susceptible que se ensucie Especialmente cuando el usuario usa máscara
singulares removido para limpieza se debe tener cuidado para prevenir la entrada de polvo en el tubo del
microscopio y el asentamiento sobre la parte trasera de los lentes de objetivo
Cuando la imagen de la muestra se visualiza con aberraciones visuales y se sospecha una lente sucia al
siguiente procedimiento puede ayudar a identificar que la necesita atención
La sustitución de la fuente de luz es fácil de realizar cuando se siguen las instrucciones del fabricante utilizar
sólo lámparas de repuesto y señala El fabricante para asegurar la compatibilidad y el inicio de la Fuente de luz
Tipos de microscopio
Todos los tipos de microscopio Usan el mismo principio básico de amplificación utilizado en el microscopio de campo
claro compuesto diferentes tipos de microscopio de contraste de fase de luz polarizada de contraste interferencia de
campo oscuro y fluorescencia como su uso crece los diferentes tipos de microscopios se han vuelto cada vez más
comunes
Microscopio de campo claro
Microscopio de campo claro es el sistema de iluminación usado en Los microscopios más viejos y más comunes
El nombre se refiere la apariencia oscura de la muestra contra un fondo brillante
Ahora con eliminación de kholer gatos no se enfoca en el plano de la muestra pero sin el diafragma de apertura
del condensador esto permite traer la iluminación uniforme de la muestra pesar del uso de una lámpara de
filamento de bobina
Microscopio de contraste de fase
en el laboratorio clinico microscopista encuentra componentes como índice refectorio bajo Qué son
difíciles de visualizar sin teñir
Con el microscopio de contraste de fase las variaciones en el índice refractivo se convierten en variaciones la
intensidad de la luz o del contraste esto permite la visualización de componentes de baja reflectividad y células
vivas ejemplo trichomonas
La microscopio de fases se basa en la teoría ondulatoria de la Luz si las ondas de luz están en fase la intensidad
de luz observada es la suma de todas las ondas individuales
Si algunas ondas son retardadas la mitad de la longitud de onda se cancelará por completo una onda de luz no
afectada lo que reduce la intensidad de la luz
Los componentes retardan la luz a diferentes grados dependiendo de su forma única índice de refracción y las
propiedades absorbencia. La conversión de microscopio de campo claro para una microscopía de contraste de
fase requiere cambios en el condensador y en el objetivo
El condensador debe ser equipado con un enfermo anular en el propio condensador o debajo de él. El Haz de
iluminación puede pasar sólo a través de ese anillo limpio del diafragma antes de penetrar en la muestra
El objetivo usado debe ser equipado con un elemento de Cambio de fase también representado nota que el
elemento de Cambio de fase también se asemeja un objetivo
Normalmente en un microscopio de campo claro Los Rayos de Luz no difractada y difractada son superpuestos
para producir la ampliación de la imagen
Estos rayos son recombinados produciendo diversos grados de contraste en imagen de la muestra áreas de la
muestra parecen claras Y oscuras con halos de variaciones intensidades
Cuando las muestras sin teñir son evaluados entidades con bajo índice refractivo son visualmente más a
parientes que cuando se utiliza la microscopía de campo claro
Microscopio de luz polarizada
La luz regular o no polarizada vibra en cada dirección perpendicular a su dirección de desplazamiento
encontraste en las despolarizada vibra en una sola dirección o plano
Cuándo la luz polarizada pasa a través de una sustancia opticamente activa esta se divide en dos haces una
sigue la trayectoria original de la luz y la otra es rotada 90 grados
El microscopio de luz polarizada tiene una amplia aplicación en el laboratorio clínico y en los productos
farmacéuticos forense patologia geología y otros cambios
Las sustancias necesitan sólo pequeñas diferencias en los índices de refracción para cambiar sensiblemente la
rotación de la luz se conocen dos tipos de birrefringencia negativo i y positivo
Si la sustancia opticamente activa gira el plano de luz polarizada hacia la derecha la sustancia tiene
birrefringencia positiva
Si la rotación es a la izquierda o en sentido contrario de las manecillas del reloj la sustancia tiene birrefringencia
negativa
Esta rotación óptica característica proporciona un medio de Identificar y distinguir las sustancias birrefringentes
por ejemplo los cristales de urato monosódico exhiben birrefringencia negativa mientras que los cristales de
pirofosfato cálcico son positivamente birrefringentes
El convertir un microscopio de campo claro uno de luz polarizada requiere dos filtros un filtro llamado filtro de
polarización que se coloca por debajo del condensador ya se ha colocado en un soporte por debajo del
condensador o directamente sobre el puerto de iluminación y filtro señales se retira fácilmente
El segundo filtro llamado El analizador está ubicado entre el objetivo y el ocular su orientación es tal que sólo
puede pasar la luz que vibra en la dirección norte sur
Muchas sustancias que se encuentran en las muestras de laboratorio clínico son birrefringentes algunos
cristales analito químico y n clinican orina y otros tienen importancia clínica en el líquido sinovial y otras
sustancias birrefringentes pueden ser encontrados debido a que otras sustancias pueden ser encontradas son
necesarias asistencia técnica y capacitación para garantizar una correcta identificación
Identificar un cristal sobre la base de la birrefringencia negativa positiva son usados un compensador de rojos
de primer orden y una placa de onda completa
La dirección de la vibración de los rayos lentos indica mediante una inscripción y en el compensador es la
inscripción permite el microscopio historia entar paralelo y perpendicular la sustancia birrefringente al
componente lento del Rayo para la observación de la birrefringencia característica de la sustancia
En el laboratorio clínico Esta técnica microscopica es usada principalmente para exámenes microscópicos de
orina y líquido sinovial para los estudios de la gota el uso del comenzar rojo predominan la diferenciación de
cristales de urato monosódico y cristales de pirofosfato cálcico en líquido sinovial
Microscopio de contraste de interferencia
2 tipos de microscopía de contraste de interferencia son modulación de contraste Hoffman y la interferencia
diferencial de contraste de nomarski
Microscopio de modulación de contraste Hoffman
Microscopía de modulación de contraste puede ser realizada con un microscopio de campo claro con 3
modificaciones
1 una aventura especial de hendidura situada debajo del condensador
2 un polarizador para el control del contraste está situado debajo de esta abertura de hendidura
3 un filtro de amplitud especial llamado modulador está situada en la parte trasera del objetivo
El principio básico de la microscopía de modulación de contraste se presenta esquemáticamente en las de la luz
entre el polarizador llega a ser polarizada y pasa la abertura de rendija especial en el plano focal frontal del
condensador
Este pulverizador es giratorio esto logré variaciones de contraste y debido a que su apertura está cubierta
parcialmente con un segundo polarizador de rotación no habrá variaciones en el contraste y la coherencia
espacial
Las modificaciones del microscopio hechos para modulación de contraste se encuentran en los mismos planos
ópticos como el microscopio de contraste de fase
La microscopio de interferencia diferencial de contraste puede producir imágenes de la muestra comparables
con los vistos con modulación de contraste sin embargo debido a que la interferencia diferencial de contraste
usa polarización para lograr imágenes tridimensionales cualquier sustancia birrefringente presenta en el plano
de la muestra compromete la imagen
Microscopio de interferencia diferencial de contraste nomarski
Microscopio de interferencia diferencial de contraste las diferencias intensidad de la imagen de la muestra se
cansan a través del uso de prismas de cristal birrefringente como divisores de Haz
Al igual que con modulación de contraste al seleccionamiento óptico formación de imágenes capa por capa es
posible debido a que la profundidad de foco es pequeña
La conversión del microscopio de campo claro microscopía interferencia diferencial de contraste requiere
1 un polarizador situado entre la fuente de luz y el condensador
2 condensador especial que contiene un prisma de wollaston modificado por cada objetivo
3 un prisma de wollaston situado entre el objetivo y el ocular
La luz de iluminación llega a ser polarizada y entra en el condensador especial donde es dividida en dos haces
Cuando se usa microscopio de interferencia diferencial de contraste en el fondo del fv puede cambiar de negro
o gris oscuro a varios colores simplemente girando el prisma si todo después del objetivo
Los fondos grises resultan imágenes tridimensionales más detalladas
Microscopio de contraste interferencial microscopio convierten las diferencias una trayectoria óptica a través de
la muestra a las diferencias de intensidad del imagen de la muestra. Ambas técnicas logran imágenes de la
muestra de alto contraste y resolución sin a Los Superiores a los obtenidos con microscopio de contraste de fase
No microscopio de contraste interferencial es excelente por la visualización detallada demuestra sin teñir su
visualización superior de todos los componentes incluyendo células vivas y sustancias de bajos índices
refractivos lo hacen particularmente Útil para exámenes microscópicos de preparaciones húmedas
Microscopio de campo oscuro
Como su nombre implica la microscopía de campo oscuro produce una imagen demuestra brillante contra un fondo
oscuro con negro
En el laboratorio clínico este método sólo se utilizan las muestras no teñidas y es la técnica preferida para la
identificación de espiroquetas. Cuando la luz pasa a través de la muestra reflexionó y fracción da lugar a la luz que entra
en el objetivo
Microscopio de campo oscuro es un medio económico de obtener aumento de contraste para facilitar la visualización de
detalles de la muestra la técnica es beneficiosa en aclarar los bordes sin límites pero no es tan buena como la
microscopía de contraste de fase Hola microscopio de contraste de interferencia en revelar detalles estructurales
internos
La ventaja del condensador de inversión es la habilidad de ser objetivos de alto y por lo tanto lograr mayor amplificación
y resolución de la muestra. Por diseño de microscopio de campo oscuro requiere fuentes de iluminación brillante ya que
sólo pequeñas cantidades de luz llegan a la lente del objetivo
Microscopio de fluorescencia
La microscopía de fluorescencia permite la visualización de sustancias fluorescentes. La luz de una longitud de onda
seleccionada se presenta a la muestra
Si una muestra fluorescente especifique está presente en la muestra a continuación la luz es absorbida y emitida a una
longitud de onda diferente y mayor cualquier luz emitida es transmitida al ocular para la visualización
El primer filtro llamado filtro de exitación selecciona la longitud de onda de la luz de situación presentada a la muestra. El
segundo filtro llamado barreiro filtro de emisión selecciona una longitud de onda específica de la luz emitida en la
muestra
Mientras que algunas sustancias biologicas son naturalmente fluorescentes la mayoría de las aplicaciones de Esta técnica
requieren atención de la muestra con colorantes fluorescentes llamados fluoróforos
Cada flor o flor o tiene una única multitud de onda de excitación y emisión En consecuencia los filtros seleccionados
varían con fluoróforo usado en el procedimiento
2 tipos de sistemas de iluminación que se diferencian en la trayectoria de la luz de exitación y están disponibles para la
microscopio de fluorescencia
Encontraste la luz de excitación en el sistema de luz reflejada se presenta la muestra desde arriba a través de la lente de
objetivo. La microscopía de fluorescencia reflejada es actualmente el método de elección sus fuentes de iluminación
variantes de lámparas halógenas de cuarzo al lámparas de arco de xenón o Mercurio
La microscopía de fluorescencia sensible a pequeñas cantidades de fluoroforos presentes en los anticuerpos antígenos
virus o cualquier otra entidad con la cual ellos quieren hacer Asociados
En resumen numerosas técnicas microscópicas están disponibles y el método seleccionado depende de varios factores
Obviamente el tipo de muestra juega un papel importante en la determinación de la técnica microscopica usada
La capacidad para producir una imagen tridimensional en la sección de una muestra ópticamente puede no ser necesaria
en algunas aplicaciones cada característica juega un papel importante en la selección de un microscopio para adaptarse a
las necesidades de cada laboratorio