Zusammenfassung der Ressource
Diagnóstico molecular
- Ventajas
- Seguridad
- No requieren aislamiento del agente infeccioso y se pueden llevar
a cabo en muestras o extractos fijados químicamente (inactivos)
- Sensibilidad
- Detectar muestras muy diluidas de ADN microbiano en un tejido, aunque el
agente no esté replicando ni produciendo otros indicios de infección
- Especificidad
- Base: diferenciad de genotipo
- Detección de material genético microbiano
- Análisis electroforético del ADN y
polimorfismo de longitud de fragmentos de
restricción
- Características fundamentales: Estructura del genoma y secuencia genética
- Enzimas de restricción
- Reconocen secuencias concretas de ADN que
tienen una estructura palindrómica
- Polimorfismo de longitud de
fragmentos de restricción
(PLFR)
- Electroforesis
- Normal
- En gel en campo pulsado
- Sondas genéticas
- Herramientas sensibles y específicas para
detectar, localizar y cuantificar secuencias de
ácidos nucleicos específicos en muestras clínicas
- Síntesis a través de métodos químicos o por clonación de
fragmentos genómicos específicos o de un genoma vírico
completo en vectores bacterianos
- Tratamientos térmicos o químicos - hibridación
- Transferencia puntual
- Pequeño volumen del extracto en un filtro de nitrocelulosa
- Transferencia Southern
- Transferencia del patrón de restricción por endonucleasas
de restricción separado electroforéticamente a un filtro de
nitrocelulosa. Hibridación de sonda ADN:ARN
- Transferencia de Northern
- ARN separado mediante electroforesis
y fijado a un filtro de nitrocelulosa.
Hibridación de sonda ARN:ADN
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
- Cebadores
- Detección de retrovirus, herpes,
papilomavirus y otros virus de ADN
- PCR-TI (transcripción inversa)
- Transcriptasa inversa de los retrovirus para
convertir el ARN vírico o el ARN mensajero en ADN
- Análisis con ADN de cadena ramificada
- Cuantificar concentraciones plasmáticas de ARN del VIH
- Detección de proteínas
- Detección de act. enzimática de transcriptasa inversa en suero o cultivo celular indica presencia de retrovirus
- Patrón proteico de un virus u otro agente
formado tras la electroforesis con dodecil
sulfato sódico en gel de poliacrilamida
(DSS-GEPA) también se puede utilizar para
identificar y distinguir diferentes cepas
víricas o bacterianas