MORFOLOGÍA DE BACTERIAS EN CULTIVO

1. CULTIVO DE LOS MICROORGANISMOS
1. Medios de Cultivo
  1. Son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos
  2. Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre; atmósfera adecuada y los factores de crecimiento necesarios.
  3. Hay que tener en cuenta los nutrientes, el pH, la necesidad de gases, el suministro de luz y un control de temperatura.
  4. tipos de medios de cultivos
    1. Líquido o caldos
      1. composición: Sintéticos (Composición química definida)
    2. Sólido (posee agente solidificante (agar) a una concentración del 1,5%)
      1. composición: Complejo (Composición química no definida)
    3. Semisólido (Concentración de agar inferior al 0.2%)
      1. Enriquecimiento
        medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
      2. Selectivo o inhibitorios
        medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros
      3. Diferenciales
        medio que permite revelar características fisiológicas de los microorganismos. Levine (permite visualizar la fermentación de lactosa por viraje de un indicador ácido-base
  5. Preparación de medios de Cultivo
    1. los medios de cultivo se preparan a partir de medios comerciales deshidratados
    2. • Medios líquidos
      1. Disolver los ingredientes del medio en el volumen requerido de agua destilada, agitando el recipiente con una varilla de vidrio o agitador magnético.
      2. Es necesario medir el pH y en caso necesario ajustarlo con soluciones de NaOH y HCl. Tapar con algodón y papel aluminio el recipiente. Posteriormente esterilizar a 121°C durante 15 minutos en autoclave, si los componentes del mismo no son termolábiles.
      3. Leer la composición química del medio de cultivo a preparar y pesar la cantidad necesaria de cada componente, según el volumen de medio a preparar.
      4. Nota: los medios líquidos pueden repartirse en tubos de ensayo (5 mL en cada uno) o fraccionarlos en matraces, frascos, botellas, que puedan esterilizarse
    3. • Medios sólidos
      1. Los medios líquidos se convierten en sólidos al agregarle un solidificante
      2. En general se usa el agar-agar.
      3. La cantidad de agar (en general 2%) se mezcla en un volumen pequeño de agua y se incorpora al medio líquido. Si éste no debe subdividirse, el matraz se lleva al autoclave, donde el agar funde. Si se debe repartir en tubos, la mezcla de agar-medio debe calentarse en Baño María para homogenizarlo.
      4. El agar funde a 100°C y se solidifica debajo de 45-50°C. Si se va servir el medio en cajas de Petri, los medios sólidos en matraces deben fundirse previamente, para adicionar entre 15 a 20 mL. de medio sobrefundido, evitando formar burbujas.
      5. Si el medio está envasado en tubos y desea que al solidificar quede inclinado, al salir del autoclave se los deja solidificar en un ángulo de 20 o 30° sobre una varilla de vidrio (agar inclinado o en pico de flauta)
2. Esterilización
  1. Se define como el proceso por el cual se eliminan todos los microorganismos incluidas las endosporas bacterianas de cualquier objeto, superficie o medio, por remoción o muerte de éstos
  2. nos permite asegurar que se trabajará exclusivamente con los microorganismos deseados.
  3. técnicas de esterilización
    1. Métodos Físicos
    2. Métodos Químicos
    3. Métodos Biológicos
2. SIEMBRA Y AISLAMIENTO
1. El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo se denomina siembra o inoculación y el paso de una muestra de un medio de cultivo a otro se denomina resiembra. Toda siembra o incluso resiembra, se puede realizar de diferentes formas de acuerdo al fin que se persiga
  1. Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
    1. Siembra en medio líquido:
      1. Se puede realizar con asa de siembra, pipeta o hisopo. Generalmente se realiza en tubos o en matraces.
    2. Siembra en medio sólido
      1. Puede ser en tubos o cajas de Petri
      2. a) Siembra del inóculo en placa
        Técnica de Barry
        •Siembra de muestra líquida en placa con asa de Digrasky
        Siembra por agotamiento o aislamiento en estría
        Siembra por agotamiento o aislamiento en estría múltiple
        Técnica de los cuatro cuadrantes
        Técnica de los tres giros
        Técnica de siembra por dilución
      3. b) Siembra del inóculo en tubo
        Siembra por estría en tubos con medio sólido inclinado (o pico de flauta)
        Siembra por picadura
        Siembra por picadura y estría
        Siembra en tubos con medios semisólidos
2. El aislamiento consiste en obtener un solo tipo de microorganismo a partir de una población mixta. En la naturaleza, los microorganismos se encuentran asociados, por lo que se recurre a la técnica de aislamiento para separarlos.
  1. Aislamiento de bacterias anaerobias
    1. Para aislar microorganismos anaerobios que son rápidamente destruidos por exposición al oxígeno, las placas pueden ser preparadas en la forma usual, y luego de sembradas, incubadas en recipientes cerrados en atmósfera sin oxígeno
3. IDENTIFICACIÓN
1. Caracterización de las colonias formadas en medios de cultivo sólidos
  1. Tamaño
  2. Color
  3. Forma
  4. Borde
  5. Elevación
  6. Luz reflejada
  7. Luz transmitida
  8. Consistencia
  9. Superficie
  10. Producción de pigmento
  11. Aspecto
2. Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración de Gram
  1. COCOS
  2. BACILOS
  3. ESPIRALES
3. Desarrollo de pruebas bioquímicas primarias y secundarias
  1. Con la aplicación y desarrollo de estas pruebas de determina el género y la especie del microorganismo en estudio

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