RFLP- Verfahren

Bedeutung/ Geschichte
1. Veranschaulichung der unterschiedlichen Längen von wiederholenden DNA- Abschnitten
  1. Verfahren von Alec Jeffrey im Jahre 1985 entwickelt
Durchführung
1. Vorprozedur
  1. Isolierung DNA
    1. Erkennung von Bausteinsequenzen, und Ausschneidung aus DNA
      1. VTNR Abschnitte besitzen bestimmte Basenfolge eingerahmz und dadurch Erkennung "Schneideenzyme"
  2. Längenordnung der DNA Fragmente/ Gel- Elektrophrorese
    1. Agarose- Gel in einem elektrischen Feld pipettiert
      1. DNA- Stücke wandern zum Pluspol, da Phosphat- Gruppe der DNA = negativ
        Fragmente variieren in Geschwindigkeit und Masse
        Je kürzer + leichter, desto schneller
        Denaturierung
        DNA- Stücke werden durch Erhitzung + Zugabe von Lauge zu Einzelsträngen aufgespalten
        Fixierung
        Stabilität + Positionbewahrung durch "Southern-Blot"
        Enzelstränge auf Nylon- Membran übertragen und durch wärme fixiert
        Hybridisierung
        Bandenmuster durch DNA- Sonde sichtbar gemacht
        DNA- Sonden bestehen aus Enzym oder radioaktiv- makiertem
        Sind komplementär auf Nylon- Membran liegende DNA- Fragmente
        Fragmente leuchten schwach auf

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