Zusammenfassung der Ressource
Métodos de cuantificación de proteinas
- La cuantificación es necesaria para determinar la concentración
de proteínas en una muestra biológica
- Los métodos están basados en:
- La propiedad de las proteínas para
absorber la luz U.V.
- La formación de los derivados
químicos
- La capacidad que tienen de unir
ciertos colorantes
- El análisis de las proteínas es necesario para:
- Conocer una proteína concreta
- Conocer la actividad específica de enzimas
- Diagnóstico de enfermedades, etc.
- Métodos de Absorción
- A280
- Rango de sensibilidad (µg)
- 100-3000
- A205
- Rango de sensibilidad (µg)
- 3-100
- A280-A260
- Rango de sensibilidad (µg)
- 100-3000
- A235-A280
- Rango de sensibilidad (µg)
- 25-700
- A224-A236
- Rango de sensibilidad (µg)
- 5-180
- A215-A225
- Rango de sensibilidad (µg)
- 2-45
- Ventajas
- No se pierden las muestras
- Desventajas
- Interfieren muchos
compuestos que absorben en
el UV
- Métodos Colorimétricos
- Lowry
- A la muestra se añade un reactivo que forma un
complejo coloreado con las proteínas, siendo la
intensidad de color proporcional a la concentración
de proteínas, según la ley de Lambert-Beer A= ε.l.c
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 25-100 a 500nm
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 2-30 a 660nm
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 1-2 a 750nm
- Conexión de exitación o
cálculo de la
concentración
- Usar Curva estándar
- Consta de
dos etapas
- 1. Los iones Cu2+ se unen a las
proteínas formando
complejos con los átomos de
nitrógeno. (color azul)
- 2. La reducción del reactivo de
Folin-Ciocalteau, por los
residuos de tirosina, actúan
sobre el cobre como
catalizador. Es amarillo que al
ser reducido por los grupos
fenólicos da lugar a un
complejo (azul intenso).
- Ventajas
- Tiene bastante sensibilidad
- Desventajas
- No todas las proteínas
reaccionan igual
- Muestra muchas
interferencias como
detergentes no iónicos
- BCA (ácido
bicinconínico)
- Reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio
alcalino. Es la base del método analítico capaz de
monitorizar el ión cuproso. formar un complejo
púrpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 0.5-10
- Conexión de
exitación o
cálculo de la
concentración
- Usar Curva estándar
- Ventajas
- Desventajas
- No se mencionan
- Método mas sensible
- Muestra menos
interferencias
- Bradford
- Se basa en la unión del colorante Comassie Blue G-250 a las
proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas
una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul
para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente
de extinción mayor que el colorante libre.
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 1-15
- Conexión de
exitación o
cálculo de la
concentración
- ε595 = 81 mL/mg cm
- Ventajas
- Muy sensible
- Rápido
- Simple
- Barato
- Muy pocas sustancias
intervienen
- Desventajas
- Muestra interferencia
con detergentes
- Biuret
- Formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los
grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico.
1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloración
es directamente proporcional a la cantidad de proteínas.
Se recomienda para la cuantificación de proteínas en
preparados muy concentrados.
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 1000-10000
- Conexión de
exitación o
cálculo de la
concentración
- ε545 = 0.06 mL/mg cm
- Ventajas
- Bastante específico
para proteínas
- Muestra pocas
interferencias
- Barato
- Desventajas
- Tiene poca sensibilidad
- Métodos Derivados
Fluorimétricos
- o-ftalaldehido
- Rango de Sensibilidad (µg)
- 1-5 λexcitación a 340 nm
- Rango de Sensibilidad (µg)
- λemisión a 475 nm
- Coeficiente de extinción o
Cálculo de la concentración
- Usar curva estándar
- Ventajas
- Muy sensible
- Desventajas
- La interferencia de aminas
contaminantes en la muestra
- No todas las muestras reaccionan igual