RT PCR METHOD

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biologia molecular
Manuel Enrique Alavrez
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Manuel Enrique Alavrez
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  • Metodología a seguir para detección de ARNm de VPH 
  • 1.-Se toman muestras  del cervix y se almacenaron a (-80ºC)
  • 2.- El ARN de todas las células se preparó usando Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA) d
  • 3.- Se preparan ADNc (complementario) en sistema de síntesis de primera cadena SuperScript III para RT-PCR 
  • 4.- Uso de PCR semicuantitativa para amplificar simultáneamente el ADNc celular de GAPDH y HPV L1.
  • 5.-Analisis de muestras 
  • Uso de centrifugación para sedimentar ARN
  •    Analisis de pureza por AGILENT 2100
  • síntesis de ADNc se realizó en ácido nucleico extraído tratado con DNase-treated 
  • TRANSCRIPCIÓN INVERSA 
  • Se multiplicaron las cadenas de ADNc 
  • REPLICACIÓN DE ADNc 
  • Se usaron cebadores y primers para determinar la cantidad en tiempo real de carga viral  (ARNm) 
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