Aplicación de métodos de PCR multiplex para la identificación molecular de tiburones: viabilidad y aplicaciones para la ordenación y conservación de la pesca en el Pacífico Oriental Tropical

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Aplicación de métodos de PCR multiplex para la identificación molecular de tiburones: viabilidad y aplicaciones para la ordenación y conservación de la pesca en el Pacífico Oriental Tropical
  1. METODOLOGÍA
    1. MUESTREO
      1. 458 muestras
        1. Tejido epidermico
          1. DNA mitocondrial
            1. COI
              1. EXTRACCIÓN
                1. Chelex 100
                  1. Retira los metales de moleulas como proteinas (despliega estructura terciaria) liberando el DNA
                    1. AMPLIFICACIÓN
                      1. PCR multiplex
                        1. Amplifica varios fragmentos del gen con varios pares de primers.
                          1. Escogieron 4 grupos de tiburones
                            1. Primers especificos para cada grupo
                              1. Diseñados a partir de la base de datos GenBank
                              2. Carcharhinidae
                                1. Sphyrna spp
                                  1. Isurus spp
                                    1. Alopias spp
                                  2. Productos de PCR
                                    1. Identificados con un gel de agarosa al 2%
                                      1. Se tiñeron con bromuro de etidio
                                        1. Se visualizaron usando un transiluminador de UV
                                    2. Polimerasa HotStar
                                      1. Permite eliminar interacciones entre primers y muestras que no son objetivos de la investigación
                                        1. No necesita inciación o activación a diferencia de la TAQ polimerasa
                                          1. Se activa por desnatrualizacion
                          2. Tejido muscular
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