Técnicas de Biología molecular
aplicadas a Biotecnología Alimentaria
IMPORTANTE IDENTIFICAR
Metodos moleculares
Permiten una mejor comprensión de la
fermentación de salchichas.
Métodos independientes
del cultivo
Pueden evitar sesgos relacionados con
el cultivo
Método DGGE
Utilizado a menudo para estudiar la
ecología de las salchichas fermentadas
Lb. sakei y Lb. curvatus
Domina en varios tipos de salchichas
mediterráneas
RAPD y Rep-PCR
Subrayaron la alta biodiversidad en
salchichas fermentadas naturalmente.
La actividad microbiana y la
interacción son un factor clave
para las características de
calidad final de las salchichas
fermentadas
Métodos independientes del
cultivo
Electroforesis en gel de
gradiente Desnaturalizante
Aplicado ampliamente en la
fermentación de salchichas
Representado por la electroforesis en
gel de gradiente desnaturalizante
(DGGE) ( Rantsiou y Cocolin, 2008 )
Técnica
Basada en la separación electroforética de ADN bicatenario generado por PCR en un gel de poliacrilamida que contiene un
gradiente de desnaturalizantes químicos (urea y formamida)
En el cambio la conformación de la estructura del ADN provoca una tasa de migración reducida de la molécula. En la
electroforesis en gel con gradiente de temperatura (TGGE), la temperatura es el principal agente desnaturalizante.
Para el perfil microbiano
El ADN y / o el ARN se someten a PCR
y / o transcripción inversa (RT) -CRP
con cebadores universales, capaces
de cebar la amplificación de todos
los microbios presentes en la
muestra
La mezcla compleja de las moléculas
de ADN obtenidas puede
diferenciarse y caracterizarse si se
separa en geles de gradiente
desnaturalizante.
Banda visibles en geles D / TGGE
Representa un componente de la microbiota
Cuantas más bandas son visibles, más complejo es el ecosistema
Las bandas se pueden extraer de los geles y después de la re-amplificación se pueden secuenciar para
obtener las especies microbianas correspondientes
Mediante el uso de estos métodos, es posible no solo perfilar las poblaciones microbianas, sino también seguir su
dinámica durante el tiempo
Los sistemas modernos de análisis de imágenes han demostrado ser valiosos para el análisis de las bandas DGGE y sus patrones
asociados