No requieren aislamiento del agente infeccioso y se pueden llevar
a cabo en muestras o extractos fijados químicamente (inactivos)
Sensibilidad
Detectar muestras muy diluidas de ADN microbiano en un tejido, aunque el
agente no esté replicando ni produciendo otros indicios de infección
Especificidad
Base: diferenciad de genotipo
Detección de material genético microbiano
Análisis electroforético del ADN y
polimorfismo de longitud de fragmentos de
restricción
Características fundamentales: Estructura del genoma y secuencia genética
Enzimas de restricción
Reconocen secuencias concretas de ADN que
tienen una estructura palindrómica
Polimorfismo de longitud de
fragmentos de restricción
(PLFR)
Electroforesis
Normal
En gel en campo pulsado
Sondas genéticas
Herramientas sensibles y específicas para
detectar, localizar y cuantificar secuencias de
ácidos nucleicos específicos en muestras clínicas
Síntesis a través de métodos químicos o por clonación de
fragmentos genómicos específicos o de un genoma vírico
completo en vectores bacterianos
Tratamientos térmicos o químicos - hibridación
Transferencia puntual
Pequeño volumen del extracto en un filtro de nitrocelulosa
Transferencia Southern
Transferencia del patrón de restricción por endonucleasas
de restricción separado electroforéticamente a un filtro de
nitrocelulosa. Hibridación de sonda ADN:ARN
Transferencia de Northern
ARN separado mediante electroforesis
y fijado a un filtro de nitrocelulosa.
Hibridación de sonda ARN:ADN
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Cebadores
Detección de retrovirus, herpes,
papilomavirus y otros virus de ADN
PCR-TI (transcripción inversa)
Transcriptasa inversa de los retrovirus para
convertir el ARN vírico o el ARN mensajero en ADN
Análisis con ADN de cadena ramificada
Cuantificar concentraciones plasmáticas de ARN del VIH
Detección de proteínas
Detección de act. enzimática de transcriptasa inversa en suero o cultivo celular indica presencia de retrovirus
Patrón proteico de un virus u otro agente
formado tras la electroforesis con dodecil
sulfato sódico en gel de poliacrilamida
(DSS-GEPA) también se puede utilizar para
identificar y distinguir diferentes cepas
víricas o bacterianas