2202049
Abrir BLAST N
- Usar BLAST n para buscar
identidades con el primer oligo
- Usar BLAST n para
buscar identidades con el
segundo oligo
- Verificar que sea la
CDS del mismo gen
en ambas búsquedas
- Cálculo del
producto
amplificado
- La mayor posición del
REVERSE menos la
menor posición del
FORWARD
- Entrar en el ID de la secuencia
- Cambiar la región mostrada
a la amplificación de los
primers (804 a 1591)
- Convertir a
formato FASTA la
región amplificada
- Copiar la secuencia y
pegarla en el NEB cutter
- Analizar el mapa de
restricción y seleccionar
Custom digest
- Seleccionar la enzima
definida por el artículo
(MspA 1I)
- Elegir el gel de agarosa al 2% y
visualizar en el gel la
simulación.
- Analizar el patrón de bandas generado y su longitud
- Se observan 4
bandas de longitud:
- 343pb, 304 pb,
73pb y de 68pb
- 343pb, 304 pb,
73pb y de 68pb
- Razonar qué ocurriría si no existe un corte en la
posición 141 del producto amplificado, o bien 945
del gen, equivalente a el codón 315
- Al eliminarse el corte entre la
posición 141 y la 142, las bandas
generadas aquí no se separarían:
- Entonces la de 68pb y la de 343pb
permanecen juntas, generando:
- Sólo 3 bandas de la siguiente longitud:
- 411pb, 304pb y de 73pb.
- 411pb, 304pb y de 73pb.
- Sólo 3 bandas de la siguiente longitud:
- Entonces la de 68pb y la de 343pb
permanecen juntas, generando:
- Al eliminarse el corte entre la
posición 141 y la 142, las bandas
generadas aquí no se separarían:
- Se observan 4
bandas de longitud:
- Analizar el patrón de bandas generado y su longitud
- Elegir el gel de agarosa al 2% y
visualizar en el gel la
simulación.
- Seleccionar la enzima
definida por el artículo
(MspA 1I)
- Analizar el mapa de
restricción y seleccionar
Custom digest
- Copiar la secuencia y
pegarla en el NEB cutter
- Convertir a
formato FASTA la
región amplificada
- Cambiar la región mostrada
a la amplificación de los
primers (804 a 1591)
- La mayor posición del
REVERSE menos la
menor posición del
FORWARD
- Cálculo del
producto
amplificado
- Verificar que sea la
CDS del mismo gen
en ambas búsquedas
- Usar BLAST n para
buscar identidades con el
segundo oligo
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