Realizar el muestreo del alga E. linza

Descripción

Mapa Mental sobre Realizar el muestreo del alga E. linza, creado por Mariel Almendariz el 23/10/2015.
Mariel Almendariz
Mapa Mental por Mariel Almendariz, actualizado hace más de 1 año
Mariel Almendariz
Creado por Mariel Almendariz hace más de 8 años
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Resumen del Recurso

Realizar el muestreo del alga E. linza
  1. Identificar el alga
    1. Volver al muestreo si no se trata de E. linza
      1. Transportar el alga al laboratorio de Maricultura de la UANL
        1. Obtener el extracto del principio activo del alga por maceración y separación con solventes
          1. Obtener la cepa JP2 de A. actinomycetemcomitans del departamento de Microbiología de la UANL
            1. Evaluar la acción del extracto del alga sobre A. actinomycetemcomitans por Concentración Mínima de Inhibición
              1. Diluir en agar como Vanden Berghe y Vietinck
                1. Disolver extractos crudos en EtOH 70% con buffer Tris 1:4 con agar al 3% a 45ºC en placas c/1 con concentraciones de 10, 5, 2.5 y 1.25 mg/mL
                  1. Inocular 10 µL de suspensión bacteriana fresca incubando a 37ºC por 24h
                    1. Utilizar Metronidazol como control positivo (c/placa con 10, 5, 2.5 y 1.25 mg/mL)
                      1. Inocular 10 µL de suspensión bacteriana fresca incubando a 37ºC por 24h
                        1. Realizar 3 repeticiones para cada concentración
                          1. Plaquear agar con EtOH
                            1. Inocular 10 µL de suspensión bacteriana fresca incubando a 37ºC por 24h
                              1. Realizar 3 repeticiones para cada concentración
                      2. Realizar 3 repeticiones para cada concentración
                  2. Cultivar en placas TSBV
                    1. Mantener en estación de trabajo anaeróbico MK3 con gas
                  3. Lavar el alga con agua destilada
                    1. Secar a TA x 1 día con ventilador eléctrico
                      1. Macerar la muestra con un molino de café
                        1. Añadir 10L de EtOH a 200 gr de muestra
                          1. Reposar a TA y repetir 3 veces
                            1. Combinar extractos y filtrar
                              1. Concentrar con evaporador al vacío a 20ºC
                                1. Disolver en 10 vol. de EtOH, filtrar y almacenar a 20ºC
                                  1. Cargar 3.1 g del extracto en columna de gel Sephadex (EtOH 95% de eluyente)
                                    1. Dejar correr fracciones de 10 mL a 1mL/min
                                      1. Tomar las fracciones (1.518 gr) conteniendo la sustancia activa
                                        1. Secar y disolver en 151.8 mL de EtOH
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