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Description
Flashcards by Alessia D'Esposito, updated more than 1 year ago
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Created by Alessia D'Esposito
almost 6 years ago
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| Question | Answer |
| Utilité des Anticorps | localiser une protéine Etudier la FONCTION d'une protéine Etudier les interactions entre les protéines |
| Anticorps recombinant | Anticorps dont on connait la séquence d'ADN monoclonal |
| Bactériophage filamenteux M13 | - Non lytique - ADN CIRCULAIRE simple brin - 11 protéines - Infecte que E.Coli par pillus sexuel via la protéine P3 |
| Phage helper = | bactériophage M13 avec une efficacité d’encapsidation réduite |
| Protéine TolA | Produite par la bactérie--> dépolymérise le pili de la bactérie pour éviter double infection |
| Thioredoxine | Recouvre ADN simple brin |
| Inconvenient de la séléction d'Atc in vivo | Couts Experimentation animale ø Spécifique Perte d'information --> Alternative Phage Display |
| Quelle machinerie utilise le bactériophage | Machinerie de l'hôte |
| Poids moléculaire d'un Atc scFv | 150kDa 25kDa |
| nanobody | Donne moins de diversité possible comparé aux scFv |
| Affichage multivalent de scFV | Tous les P3 expriment un scFV Affinité moyenne pour l'Ag |
| Affichage monovalent | 1scFV par bactériophage Affinité forte pour l'Ag |
| Type 3 | 1 gève avec scFV+ P3 |
| Type 33 | 2 gènes a) scFV + P3 promoteur faible b) P3 promoteur fort |
| , | |
| librairie de phage | 10^12 phages |
| libraries synthétiques | en faisant une mutagenese aléatoire des CDR du VH et VL CDR = Complementarity Determining Regions |
| Biopanning | Sélection des bactériophages d'intéret (par elisa) |
| Avantage du phage display | |
| Les 2 principales facon de créer des Atc recombinant | In vivo: à partir d'hibridome In vitro: gène synthétiques |
| Combien de P3 par bactériophage | 5 |
| Lors de la sortie phage M13 après avoir infecté la bactérie, quelles protéines remplacent la P5 | P7,P8,P9 |
| Caractéristique du phagmide | - double brin - possède cassette résistance antibio - OR bactérie + OR batériophage - gène de fusion scFV-P3 promoteur faible - ne produit pas les 11 protéines, empeche au bactériophage qui a inséré le phagmide de pvr effectuer un cycle complet |
| Utilité de la cassette de résistance du phagmide | permet d’éliminer les bact qui ont été infecté par bactériophage ayant intégré l’ADN du phage helper (contient pas de scFV) |
| Les etapes du phage display | |
| Phage rescue | amplification des phages sélectionnés au round 1 et augmenter l'affinité de l'Atc pour l'Ag |
| 1 colonie = | 1scFV monoclonal 1Ecoli contenant chacun 1 scFV |
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