MÉTODOS Y RESULTADOS

TUBB8 y la detención de la maduración de ovocitos humanos
1. Se identificó un patrón de infertilidad (autosómico dominante) de las mujeres de las 4 generaciones de la familia 1.
  1. Paciente II-5: se intentó fertilización InVitro de ovocitos en metafase 1, que no maduraron después del cultivo.
  2. Paciente II-4: la inyección de esperma cedió 3 ovocitos en metafase y 1 con morfología anormal. No tenían huso visible y el morfológicamente anormal falló en la fertilización.
2. El análisis de la familia 1 que arrojó a 3 miembros con la mutación implica una sola mutación en la región codificante de TUBB8.
3. Se identificaron otras 6 mutaciones del TUBB8 en 7 pacientes infértiles con un fenotipo similar
  1. Mutación transmitida por el padre se evidenció en 5 pacientes: 2 de la familia 2, 1 de la familia 5, 1 de la familia 6 y 1 de la familia 7
  2. Una mutación de Novo similar apareció en 2 pacientes: 1 de la familia 3 y 1 de la familia 4
4. Las otras 17 familias tenían infertilidades primarias que no estaban relacionadas al TUBB8
5. Los resultados y el análisis de la expresión del alelo específico en un solo ovocito (S176L) implicó que las mutaciones del TUBB8 están estrechamente relacionadas con el paro en la maduración del ovocito, pues todos al ser detenidos se encontraban en metafase I.
  1. Es más probable que la mutación de S176L inhiba el ensamblaje de los microtúbulos, causando su inestabilidad
Participantes del estudio
1. Pacientes de 24 familias con mutación del gen.
  1. Fueron apoyados por instituciones que aprobaron el estudio y brindaron el consentimiento informado.
Procedimientos del estudio
1. Secuenciamos el exoma de 5 mujeres de la familia 1
  1. 3 mujeres afectadas: presentaban una variante considerada candidata a mutación.
  2. 2 mujeres sanas: no presentaban la variante
    1. No hay una prevalencia mayor del 0.1%
  3. Se observó la expresión del gen, prediciendo efectos de la mutación en la proteína estructural
    1. Se probaron los efectos funcionales de las mutaciones InVitro en células HeLa, levaduras, células de ratón y ovocitos humanos.
Suministro de TUBB8 y β-tubulina en ovocitos humanos
1. Las mutaciones de TUBB1, 2A, 2B, 3, 4A y 4B fueron descritas, lo que causó un amplio rango de desórdenes relacionados con la migración neuronal.
2. La función de TUBB8 es incierta, pero se cree que influencia el comportamiento microtubular del ovocito. Se localiza en el huso mitótico
  1. Es la única microtubulina expresada en altos niveles en diferentes estadios del desarrollo del ovocito. Es esencial en la ausencia de esperma madura y en células somáticas del hígado y el cerebro
Implicaciones estructurales
1. En el estudio se encontraron residuos de TUBB8 mutantes en la tubulina.
  1. Se halla en una región clave (Bucle B-T5) encargada de la hidrólisis del GTP
2. Los niveles altos o intermedios de TUBB8 mutado incorporado a los microtúbulos causa pérdida de la red de los mismos.
3. Ensamblamiento In Vitro de α/β Tubulina
  1. La generación de novo de heterodímero de tubulina requiere la acción concertada de un espectro de chaperones (PFD, CCT, TBCA, TBCB, TBCC, TBCD, TBCE)
  2. Ninguna de las mutaciones tuvo influencia en la eficiencia traduccional, pero las proteínas mutantes de TUBB8 mostraron un espectro de diferencias cuantitativas en el flujo característica de la etiqueta de los complejos binarios
    1. Estos datos revelan una gama de defectos de ensamblaje de heterodímeros causados por las mutaciones de TUBB8
4. Interrupción de microtúbulos In Vivo
  1. TUBB8 DE TIPO SALVAJE: ensamblaje en una red de mucrotúbulos normal excepto a niveles elevados de expresión transgénica
  2. TUUBB8 MUTANTE: a niveles intermedios o altos de expresión se incorporó a los microtúbulos con una apariencia anormal y con frecuencia causó la pérdida completa de la red de microtúbulos ("obliteración")
    1. La expresión In Vivo de TUBB8 mutado da como resultado la interrupción de la arquitectura de los microtúbulos, con el grado de alteración que depende de la mutación. La interrupción está fuertemente influenciada por el contexto de isotipo B-Tubulina
5. TUBB8 y deterioro del ensamblaje del huso
  1. Relación entre la mutación de TUBB8 y la infertilidad
  2. TIPO SALVAJE: maduración normal durante 12 horas después de la rotura germinal-vesicular, con un huso en forma de barril claramente visible
  3. MUTADOS: la detención de la maduración y un huso deformado, así como una reducción en la velocidad de extrusión del primer cuerpo polar

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	Created by Laura Uribe about 7 years ago