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Description
Mind Map by Evelin Zambrano, updated more than 1 year ago
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Created by Evelin Zambrano
about 6 years ago
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SUSTANCIAS FIJADORAS SIN FORMOL
- Fijador de Zirkle Los tejidos fijados con fijadores básicos muestran preservación preferente de
mitocondrias, núcleo, y (algunas veces) vacuolas, con el mantenimiento del citoplasma
mayoritariamente disuelto. La cromatina y "spindles" son también disueltos. Se trata de un fijador
bastante satisfactorio, dentro de los pocos que hay Dicromato potásico------2.5 g Dicromato
amónico------2.5 g Sulfato cúprico----------2.0 g Agua destilanda-------400 ml Fijar 24-48 horas, lavar con
agua, deshidratar e imbibir en parafina.
- Fijador de Carnoy El fijador de Carnoy es un fijador que contiene cloroformo. Penetra en tejidos
extremadamente rápido y pude fijar piezas de tejido de pequeño tamaño en minutos en vez de las
horas requeridas con otros fijadores. Los tejidos delicados pueden ser dañados cuando se transiferen
de soluciones acuosas a este fijador, debido a la extrema hidrofobicidad del cloroformo y resultando
en una deshidratación rápida de los tejidos. Reservar el fijador de Carnoy para muestras más fuertes.
Este fijador ha sido usado tradicionalmente para estructuras citológicas. Etanol absoluto---------60 ml
Ácido acético glacila----10 ml Cloroformo-------------30 ml Fija piezas de tejido de pequeño tamaño
aproximadamente en 1 hora, lavar varias veces en alcohol absoluto, infiltrar e incrustar.
- Acético-ósmico-dicromato Se trata de un fijador básico que preserva principalmente mitocondrias,
núcleo y algunas veces vacuolas. Enviado por Emmel y Cowdry, este fijador es excelente para
mitocondrias. Debido a la presencia de ácido ósmico, la penetración en los tejidos es lenta y no
extensiva; por eso se deben usar muestras pequeñas. Dicromato potásico (2.5% acuoso) ---8 ml Ácido
ósmico (2% acuoso) -----------2ml Ácido acético glacial------------- una gota Fijar muestras pequeñas
durante 24-48 horas, lavar en agua, deshidratar e inhibir en parafina.
- Acido crómico. Se utiliza en soluciones al 2%. Hay que tener precaución al usarlo, puesto que disuelve
las láminas medias y las celulosas. Después de una fijación de 1-2 horas, se debe sacar la muestra del
mismo y pasarla a un conservador. Es un buen fijador si se toman las precauciones debidas. El ácido
crómico como fijador es el más usado en investigación citológica. Es un oxidante fuerte y fijador
coagulante y resulta en una fijación ácida mostrando buena preservación de los ácidos nucleicos y
proteínas. Las sales de cromo se disocian en soluciones acuosas formando complejos Cr-O-Cr, que
reaccionan tanto con lípidos como con proteínas.
- Acroleína La acroleína es un fijador que penetra rápidamente en los tejidos y es muy bueno para fijar
tejidos delicados y preservar vacuolas y orgánulos subcelulares. Generalmente la acroleina se reserva
para métodos preparatorios que utilizan como medio de imbibición plásticos, ya que las estructuras
finas preservadas son retenidas pobremente por la parafina. La acroleína es inestable a la luz y a pH
elevado, formando un disacril sólido.
- Carmín acético hidrato de cloral. Se trata de un fijador y colorante al mismo tiempo para la tinción de
protalos de helechos. La siguiente formulación está preparada para 200 ml de fijador.
- Etanol-Glicerina-Agua o Alcohol-Glicerina-Agua (G.A.W.) Alcohol 96º-----1/3 Glicerina--------1/3 Agua
destilada--1/3 Fijador lento y conservador perecedero, máximo dos años de permanencia en la
solución. No endurece; para cortar por congelación debe lavarse la muestra en agua destilada un
mínimo de cuatro horas.
- Fijador de Chamberlain Es un fijador de ácido crómico que ha mostrado ser útil para fijar tejidos
delicados y para trabajo con embriones. La formulacion "débil" debe ser usada para meristemos de
tallos y raíces, ovarios u óvulos aislados. La formulación "fuerte" ha sido utilizada con éxito para la
preservación de musgos, algas, y hongos. Fija muestras de tejido muy pequeña en 24-48 horas, lavar
con agua destilada y proceder a la realización de sercciones.
- Fijador de Farmer El fluido de Farmer es una solución fijadora anhidro que causa rápida
deshidratación y fijación. Como con el fijador de Carnoy, el rápido cambio de agua en el tejido puede
causar graves alteraciones en los tejidos. Sin embargo estos dos fijadores son excelentes para
investigación citológica.
- Fijación fase partida Un método de fijación diferente es la fijación en fase partida. En este método el
fijador acuoso se mezcla con un disolvente orgánico, generalmente heptano, agitado, y usado
inmediatamente.
- Metanol-ácido acético (MAA) Las anteras han sido fijadas con éxito para la investigación de
cromosomas meióticos en estado paquiteno usando metanol-ácido acético. Quitar las anteras de los
brotes florales seccionando en tampón citrato (citrato sódico 0.01 M, pH 4.6). Fijar las anteras en MAA
reciente a -20ºC (3:1).
- Mezcla Cromo-Acética. Para preparar 100 ml. a) Débil: Anhidrido crómico, solución acuosa al
10%-----------2,5 ml. Ácido acético al 10%-----------------------------------5 ml. Agua
destilada---------------------------------------72,5 ml. Fijador para Algas filamentosas, Hongos y Briofitos.
- Solución de Flemming La solución de Flemming es un buen fijador citológico que contiene el cromo
como agente coagulante y el fijador aditivo tetróxido de osmio. La fijación con tetróxido de osmio se
retringe a las paredes celulares exteriores debito a su baja tasa de penetración en tejidos, mientras
que el ácido acético entra concienzudamente en los tejidos. Por tanto, este es el mejor uso de la
solución de Flemming sobre muestras de tejido de tamaño pequeño.
- Teróxido de osmio Aunque no es un fijador común para microscopía de campo claro, el tetróxido de
osmio tiene un entrecruzamiento extermadamente útil, fijador aditivo para estabilizar lípidos y por
tanto la estructura de membranas.
- Acetona La Acetona se fabrica principalmente mediante los procesos de peroxidación del Cumeno o
la deshidrogenación del Alcohol Isopropílico (2 – Propanol).
- Bicloruro de mercurio: Su fórmula química es Cl2Hg y se lo emplea, generalmente, en solución acuosa
al 5%. Esta solución tiene un pH aproximado a 3.0 y su potencial de oxidación es 0,75 volt. El Hg es un
metal bivalente que se adiciona a sitios insaturados de lípidos y a puentes disulfuros en proteínas con
gran especificidad, provocando la preservación de estos componentes tisulares
- Dicromato de potasio: Se lo utiliza en solución acuosa al 1,5% y su fórmula molecular es Cr2O7K2. A
esa concentración tiene un pH de 3,9 y su potencial de oxidación en moderado (0,79 volt.). Durante su
disolución origina los aniones dicromato y cromato hidrogenado, los cuales permiten la correcta
preservación de lípidos y proteínas respectivamente. Penetra lentamente otorgando al tejido una
rigidez que favorece el seccionamiento con micrótomo. Las proteínas se fijan por coagulación, los
ácidos nucleicos tienden a disolverse; mientras que las histonas nucleares son fuertemente
gelatinizadas. En el caso de los lípidos son atacados por sus dobles ligaduras y los vuelve más
resistentes a los solventes orgánicos.
- Acido crómico: Se lo emplea en bajas concentraciones (0,5%). Su fórmula química es CrO3 y su
potencial de oxidación es 1,08 volt. Se lo recomienda para preservar lípidos, ya que actúa de la misma
forma que el dicromato de potasio
- Acido crómico: Se lo emplea en bajas concentraciones (0,5%). Su fórmula química es CrO3 y su
potencial de oxidación es 1,08 volt. Se lo recomienda para preservar lípidos, ya que actúa de la misma
forma que el dicromato de potasio
- Dicromato de potasio: Se lo utiliza en solución acuosa al 1,5% y su fórmula molecular es Cr2O7K2. A
esa concentración tiene un pH de 3,9 y su potencial de oxidación en moderado (0,79 volt.). Durante su
disolución origina los aniones dicromato y cromato hidrogenado, los cuales permiten la correcta
preservación de lípidos y proteínas respectivamente. Penetra lentamente otorgando al tejido una
rigidez que favorece el seccionamiento con micrótomo. Las proteínas se fijan por coagulación, los
ácidos nucleicos tienden a disolverse; mientras que las histonas nucleares son fuertemente
gelatinizadas. En el caso de los lípidos son atacados por sus dobles ligaduras y los vuelve más
resistentes a los solventes orgánicos.
- Bicloruro de mercurio: Su fórmula química es Cl2Hg y se lo emplea, generalmente, en solución acuosa
al 5%. Esta solución tiene un pH aproximado a 3.0 y su potencial de oxidación es 0,75 volt. El Hg es un
metal bivalente que se adiciona a sitios insaturados de lípidos y a puentes disulfuros en proteínas con
gran especificidad, provocando la preservación de estos componentes tisulares
- Acetona La Acetona se fabrica principalmente mediante los procesos de peroxidación del Cumeno o
la deshidrogenación del Alcohol Isopropílico (2 – Propanol).
- Teróxido de osmio Aunque no es un fijador común para microscopía de campo claro, el tetróxido de
osmio tiene un entrecruzamiento extermadamente útil, fijador aditivo para estabilizar lípidos y por
tanto la estructura de membranas.
- Solución de Flemming La solución de Flemming es un buen fijador citológico que contiene el cromo
como agente coagulante y el fijador aditivo tetróxido de osmio. La fijación con tetróxido de osmio se
retringe a las paredes celulares exteriores debito a su baja tasa de penetración en tejidos, mientras
que el ácido acético entra concienzudamente en los tejidos. Por tanto, este es el mejor uso de la
solución de Flemming sobre muestras de tejido de tamaño pequeño.
- Mezcla Cromo-Acética. Para preparar 100 ml. a) Débil: Anhidrido crómico, solución acuosa al
10%-----------2,5 ml. Ácido acético al 10%-----------------------------------5 ml. Agua
destilada---------------------------------------72,5 ml. Fijador para Algas filamentosas, Hongos y Briofitos.
- Metanol-ácido acético (MAA) Las anteras han sido fijadas con éxito para la investigación de
cromosomas meióticos en estado paquiteno usando metanol-ácido acético. Quitar las anteras de los
brotes florales seccionando en tampón citrato (citrato sódico 0.01 M, pH 4.6). Fijar las anteras en MAA
reciente a -20ºC (3:1).
- Fijación fase partida Un método de fijación diferente es la fijación en fase partida. En este método el
fijador acuoso se mezcla con un disolvente orgánico, generalmente heptano, agitado, y usado
inmediatamente.
- Fijador de Farmer El fluido de Farmer es una solución fijadora anhidro que causa rápida
deshidratación y fijación. Como con el fijador de Carnoy, el rápido cambio de agua en el tejido puede
causar graves alteraciones en los tejidos. Sin embargo estos dos fijadores son excelentes para
investigación citológica.
- Fijador de Chamberlain Es un fijador de ácido crómico que ha mostrado ser útil para fijar tejidos
delicados y para trabajo con embriones. La formulacion "débil" debe ser usada para meristemos de
tallos y raíces, ovarios u óvulos aislados. La formulación "fuerte" ha sido utilizada con éxito para la
preservación de musgos, algas, y hongos. Fija muestras de tejido muy pequeña en 24-48 horas, lavar
con agua destilada y proceder a la realización de sercciones.
- Etanol-Glicerina-Agua o Alcohol-Glicerina-Agua (G.A.W.) Alcohol 96º-----1/3 Glicerina--------1/3 Agua
destilada--1/3 Fijador lento y conservador perecedero, máximo dos años de permanencia en la
solución. No endurece; para cortar por congelación debe lavarse la muestra en agua destilada un
mínimo de cuatro horas.
- Carmín acético hidrato de cloral. Se trata de un fijador y colorante al mismo tiempo para la tinción de
protalos de helechos. La siguiente formulación está preparada para 200 ml de fijador.
- Acroleína La acroleína es un fijador que penetra rápidamente en los tejidos y es muy bueno para fijar
tejidos delicados y preservar vacuolas y orgánulos subcelulares. Generalmente la acroleina se reserva
para métodos preparatorios que utilizan como medio de imbibición plásticos, ya que las estructuras
finas preservadas son retenidas pobremente por la parafina. La acroleína es inestable a la luz y a pH
elevado, formando un disacril sólido.
- Acido crómico. Se utiliza en soluciones al 2%. Hay que tener precaución al usarlo, puesto que disuelve
las láminas medias y las celulosas. Después de una fijación de 1-2 horas, se debe sacar la muestra del
mismo y pasarla a un conservador. Es un buen fijador si se toman las precauciones debidas. El ácido
crómico como fijador es el más usado en investigación citológica. Es un oxidante fuerte y fijador
coagulante y resulta en una fijación ácida mostrando buena preservación de los ácidos nucleicos y
proteínas. Las sales de cromo se disocian en soluciones acuosas formando complejos Cr-O-Cr, que
reaccionan tanto con lípidos como con proteínas.
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