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Mind Map by Eduardo Molina, updated more than 1 year ago
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Created by Eduardo Molina
almost 4 years ago
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Práctica 10
Prueba de
fijación de
complemento
directa
- Objetivo general
- Comprender el fundamento teórico de la prueba de fijación de complemento aplicando una metodología
que le permita interpretar los resultados y conocer sus aplicaciones en el diagnóstico clínico veterinario.
- Comprender el fundamento teórico de la prueba de fijación de complemento aplicando una metodología
que le permita interpretar los resultados y conocer sus aplicaciones en el diagnóstico clínico veterinario.
- Objetivos particulares
- 1. Aplicar la metodología de la prueba de fijación
de complemento para el diagnóstico de
brucelosis en rumiantes mediante la utilización
del antígeno comercial y los sueros de bovino
sospechosos, con el fin de identificar un resultado
positivo y uno negativo
- . 2. Interpretar los
resultados obtenidos
en la prueba de
fijación de
complemento
directa, para
determinar el título
de anticuerpos en el
suero sospechoso,
mediante la
observación de las
reacciones positivas y
negativas.
- 1. Aplicar la metodología de la prueba de fijación
de complemento para el diagnóstico de
brucelosis en rumiantes mediante la utilización
del antígeno comercial y los sueros de bovino
sospechosos, con el fin de identificar un resultado
positivo y uno negativo
- Introducción
- El sistema del complemento es un grupo de más de 30 proteínas tanto del suero normal de
todos los mamíferos y aves, como de la superficie de diferentes células. Estas proteínas
normalmente se encuentran inactivas y una vez que se activan tienen diferentes funciones
biológicas como la opsonización, la quimiotaxis y la lisis celular, que favorecen la reacción
inflamatoria y participan en la remoción de complejos inmunes.
- Existen dos tipos
de pruebas de
fijación de
complemento: la
directa y la
indirecta.
- La prueba indirecta se
utiliza cuando el suero
sospechoso proviene de
un ave, ya que sus
anticuerpos no tienen la
capacidad de fijar
complemento de
mamíferos. La sensibilidad
de la prueba de fijación de
complemento es muy alta
pues detecta menos de un
nanogramo de proteína.
- La prueba indirecta se
utiliza cuando el suero
sospechoso proviene de
un ave, ya que sus
anticuerpos no tienen la
capacidad de fijar
complemento de
mamíferos. La sensibilidad
de la prueba de fijación de
complemento es muy alta
pues detecta menos de un
nanogramo de proteína.
- Existen dos tipos
de pruebas de
fijación de
complemento: la
directa y la
indirecta.
- El sistema del complemento es un grupo de más de 30 proteínas tanto del suero normal de
todos los mamíferos y aves, como de la superficie de diferentes células. Estas proteínas
normalmente se encuentran inactivas y una vez que se activan tienen diferentes funciones
biológicas como la opsonización, la quimiotaxis y la lisis celular, que favorecen la reacción
inflamatoria y participan en la remoción de complejos inmunes.
- Generalidades de la prueba: La prueba de fijación del complemento directa se fundamenta en la activación del
complemento por la vía clásica, en donde es necesaria una reacción antígeno-anticuerpo para iniciar la
reacción. Los elementos que participan en esta prueba son:
- Suero sospechoso,
- al cual deberá inactivársele el
complemento incubándolo en
baño María a 60 °C durante 30
minutos.
- al cual deberá inactivársele el
complemento incubándolo en
baño María a 60 °C durante 30
minutos.
- Antígeno
- no particulado y previamente titulado.
- no particulado y previamente titulado.
- Complemento
- Generalmente se utiliza suero normal como
fuente de complemento porque es el que tiene
mayor actividad hemolítica. Este suero debe
estar previamente titulado y estandarizado.
- Generalmente se utiliza suero normal como
fuente de complemento porque es el que tiene
mayor actividad hemolítica. Este suero debe
estar previamente titulado y estandarizado.
- Sistema hemolítico o sistema indicador formado por:
- hemolisina, anticuerpos contra glóbulos rojos de ovino previamente
titulados y estandarizados; glóbulos rojos de ovino previamente lavados y
preparados en una suspensión de dos a tres por ciento.
- hemolisina, anticuerpos contra glóbulos rojos de ovino previamente
titulados y estandarizados; glóbulos rojos de ovino previamente lavados y
preparados en una suspensión de dos a tres por ciento.
- La prueba consta de dos fases::
- Fase invisible:
- En esta fase se trabaja con un primer sistema
antígenoanticuerpo, enfrentando el suero
sospechoso (elemento desconocido), el
antígeno específico (elemento conocido) y el
complemento.
- En esta fase se trabaja con un primer sistema
antígenoanticuerpo, enfrentando el suero
sospechoso (elemento desconocido), el
antígeno específico (elemento conocido) y el
complemento.
- Fase visible:
- Se agrega un segundo sistema
antígeno-anticuerpo o sistema
hemolítico formado por los
glóbulos rojos de ovino y la
hemolisina.
- Se agrega un segundo sistema
antígeno-anticuerpo o sistema
hemolítico formado por los
glóbulos rojos de ovino y la
hemolisina.
- Cuando el resultado es
positivo:
- Cuando el resultado es
negativo:
- no habrá una reacción antígeno- anticuerpo en la fase invisible y el complemento
quedará libre, entonces se podrá unir al segundo sistema antígeno-anticuerpo o
sistema hemolítico, y se observará la hemólisis.
- no habrá una reacción antígeno- anticuerpo en la fase invisible y el complemento
quedará libre, entonces se podrá unir al segundo sistema antígeno-anticuerpo o
sistema hemolítico, y se observará la hemólisis.
- en la fase invisible habrá una reacción antígeno anticuerpo y el complemento se unirá
a esta reacción Ag-Ac-C’. Como el C’ se unió a la primera fase, no se unirá al sistema
hemolítico y se observará sedimentación de los glóbulos rojos.
- Cuando el resultado es
negativo:
- Fase invisible:
- Suero sospechoso,
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