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Description
Mind Map by Mariel Almendariz, updated more than 1 year ago
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Realizar el muestreo del alga E. linza
- Identificar el alga
- Volver al muestreo si
no se trata de E. linza
- Transportar el alga al laboratorio de
Maricultura de la UANL
- Obtener el extracto del principio
activo del alga por maceración y
separación con solventes (Park et al.,
2013)
- Obtener la cepa JP2 de A.
actinomycetemcomitans del
departamento de
Microbiología de la UANL
- Evaluar la acción del extracto del alga
sobre A. actinomycetemcomitans por
Concentración Mínima de Inhibición
- Diluir en agar como
Vanden Berghe y Vietinck
- Disolver extractos crudos en EtOH
70% con buffer Tris 1:4 con agar al 3%
a 45ºC en placas c/1 con
concentraciones de 10, 5, 2.5 y 1.25
mg/mL (Ertürk& Tas, 2011)
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a 37ºC
por 24h
- Utilizar Metronidazol como
control positivo (c/placa con
10, 5, 2.5 y 1.25 mg/mL)
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a
37ºC por 24h
- Realizar 3
repeticiones para cada
concentración
- Plaquear agar con EtOH
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a
37ºC por 24h
- Realizar 3
repeticiones para
cada
concentración
- Realizar 3
repeticiones para
cada
concentración
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a
37ºC por 24h
- Realizar 3
repeticiones para cada
concentración
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a
37ºC por 24h
- Utilizar Metronidazol como
control positivo (c/placa con
10, 5, 2.5 y 1.25 mg/mL)
- Realizar 3
repeticiones
para cada
concentración
- Inocular 10 µL de
suspensión bacteriana
fresca incubando a 37ºC
por 24h
- Disolver extractos crudos en EtOH
70% con buffer Tris 1:4 con agar al 3%
a 45ºC en placas c/1 con
concentraciones de 10, 5, 2.5 y 1.25
mg/mL (Ertürk& Tas, 2011)
- Diluir en agar como
Vanden Berghe y Vietinck
- Cultivar en placas TSBV
(Slots et al. 1982)
- Mantener en
estación de trabajo
anaeróbico MK3
con gas
- Mantener en
estación de trabajo
anaeróbico MK3
con gas
- Evaluar la acción del extracto del alga
sobre A. actinomycetemcomitans por
Concentración Mínima de Inhibición
- Lavar el alga
con agua
destilada
- Secar a TA x 1 día
con ventilador
eléctrico
- Macerar la
muestra con un
molino de café
- Añadir 10L de EtOH a
200 gr de muestra
- Reposar a TA y
repetir 3 veces
- Combinar
extractos y filtrar
- Concentrar con
evaporador al
vacío a 20ºC
- Disolver en 10 vol.
de EtOH, filtrar y
almacenar a 20ºC
- Cargar 3.1 g del extracto en
columna de gel Sephadex
(EtOH 95% de eluyente)
- Dejar correr fracciones de 10 mL a 1mL/min
- Tomar las
fracciones
(1.518 gr)
conteniendo la
sustancia activa
- Secar y disolver en
151.8 mL de EtOH
- Secar y disolver en
151.8 mL de EtOH
- Tomar las
fracciones
(1.518 gr)
conteniendo la
sustancia activa
- Dejar correr fracciones de 10 mL a 1mL/min
- Cargar 3.1 g del extracto en
columna de gel Sephadex
(EtOH 95% de eluyente)
- Disolver en 10 vol.
de EtOH, filtrar y
almacenar a 20ºC
- Concentrar con
evaporador al
vacío a 20ºC
- Combinar
extractos y filtrar
- Reposar a TA y
repetir 3 veces
- Añadir 10L de EtOH a
200 gr de muestra
- Macerar la
muestra con un
molino de café
- Secar a TA x 1 día
con ventilador
eléctrico
- Obtener la cepa JP2 de A.
actinomycetemcomitans del
departamento de
Microbiología de la UANL
- Obtener el extracto del principio
activo del alga por maceración y
separación con solventes (Park et al.,
2013)
- Volver al muestreo si
no se trata de E. linza
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