Parte III. Determinación del punto Isoeléctrico de la caseína.

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Parte III. Determinación del punto Isoeléctrico de la caseína.
  1. a. Coloque aproximadamente 250 mg de caseína en un vaso de 50mL.
    1. b. Agregue 20ml de agua destilada y 5 mL de NaOH 1N; agite hasta lograr una solución total de la caseína.
      1. c. Una vez disuelta la caseína, se vierte en un matraz aforado de 50 ml, adicione 5 mL de ácido acético 1N y diluya con agua destilada hasta 50mL y mezcle bien.
        1. d. La solución debe ser clara y limpia y si no es así, debe volver a filtrar.
          1. e. Coloque el precipitado en un vaso de precipitado pequeño previamente pesado, vuelva a pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5mL/g de éter etílico.
            1. f. Filtre nuevamente.
              1. g. Deseche el líquido quedando un precipitado blanco de fácil manipulación que es la caseína.
                1. a. En diez tubos de ensayo, limpios y secos adicione exactamente los volúmenes de los reactivos según la siguiente tabla: TABLA 1. De disoluciones añadir 1 ml de disolución de caseína a cada tubo.
                  1. b. Medir experimentalmente el pH de todos los tubos, que debe cubrir un rango aproximado semejante al teórico (3 a 6,5). Anotar los valores reales en la Tabla, que deben ser semejantes a los expresados y en todo caso crecientes.
                    1. c. Añadir 1 mL de disolución de caseína preparada en la parte II a cada tubo.
                      1. d. Agitar suavemente cada uno de los tubos y esperar aproximadamente 3 minutos.
                        1. e. Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm.
                          1. f. Graficar la absorbancia frente al pH, y determinar el punto Isoeléctrico experimental para los datos obtenidos
                            1. g. Consultar el punto isoeléctrico teórico de la caseína y compárelo con el punto isoeléctrico experimental obtenido.
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