Secuenciación y ensamblaje de Kikuyo

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Secuenciación y ensamblaje del genoma de Kikuyo
Camila Montes
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Camila Montes
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Secuenciación y ensamblaje de Kikuyo
  1. Illumina HiSeq2500
    1. Librería 2 (450 pb)
      1. Librería 1 (230 pb)
        1. Reads 150 pb
          1. Ensamblaje de referencia
            1. BWA
              1. Se utilizó como referencia la especie más cercana filogenéticamente (Setaria italica). Hubo problemas pasando de SAM a BAM
              2. SOAP2
                1. Se utilizó como referencia Setaria italica, Zea maiz y Oryza sativa. Sólo funcionó con S. italica. El programa generó un SAM y se pudo pasar a BAM. Generó un fasta (Kikuyo_pilon.fasta).
                  1. BLAST
                    1. Local

                      Annotations:

                      • Blast con la secuencia de los genes en otras especies (maíz, arroz, miyo y trigo) y el kikuyo_pilon
                      1. Se encuentra match con varias secuencias del gen amt1.1

                        Annotations:

                        • El mejor resultado fue con Triticum aestivum.  Resultado de blast: NC_0284501_Pilon/sp:Triticum/%id:89.56%/a.l: 1418/s-e:3144(4354-5770)/ss-e:5-1412
                        1. Blast local con lib 1 y 2
                          1. Se encuentra match con dos scaffold en ambas librerías: lib1: scaffolds 94740 - 94741; lib2: scaffolds 62640 - 106864
                            1. Se extraen las secuencias de los scaffolds de ambas librerías. Se comparan con las secuencias de los genes en T. aestivum y las demás sp.
                              1. Los dos scaffolds tienen secuencias compartidas iguales y se fusionan
                                1. ClustalW
                                  1. Buenos resultados en relación a las otras sp (estos resultados se obtuvieron con la librería 1; la librería 2 tuvo malos resultados)
                                    1. Secuencia gen Amt 1.1

                                      Attachments:

                        2. Se encuentra match con varias secuencias del gen amt 2.1

                          Annotations:

                          • varios resultados con alto porcentaje de identidad. Se extraen las secuencias y se analizan con clustalW.  Los mejores resultados fueron las secuencias 2 y 7. Se escoge la secuencia 2 porque es igual que la 7 pero más extensa. Resultado de blast: sc: NC_0284541_pilon/sp:o.sativa/%id:81.22 - 74.62/al:905 - 457/qs-e:4245(8403-9299) - 4246(0348-0792)/ss-e:(354-1230) - (1225-1672)   
                          1. Blast local con lib 1 y 2
                            1. Se encuentra match con dos scaffold en ambas librerías: lib1: scaffold 574808 x2; lib2: scaffolds 131252 - 160840
                              1. Se extraen las secuencias de los 3 scaffolds y se hace clustalW. Se fusionan para obtener una secuencia consenso.
                                1. ClustalW
                                  1. Se comparan con las otras especies y se obtienen buenos resultados
                                    1. Secuencia gen Amt 2.1

                                      Attachments:

                          2. No se encuentra match para el gen Nrt 1.1
                          3. Blast2go
                            1. No terminó el programa, el pc se bloquea
                    2. Ensamblaje de novo
                      1. Mejoramiento de ensamblaje
                        1. GAA
                          1. Blat
                            1. Se llenó la memoria del servidor
                            2. Integrado con Blat. La memoria del servidor se llenó
                            3. Metassembler

                              Attachments:

                              1. Se modificaron los reads y el programa funcionó
                                1. Resutlado: 236.043 scaffolds
                              2. SSPACE
                                1. No mejoró los resultados anteriores. El número de Scaffolds sigue siendo el mismo en comparación con SOAPdenovo
                              3. SGA
                                1. El proceso se para en el análisis de las distancias entre los reads

                                  Annotations:

                                  • El problema debe estar en el nombre de los reads
                                2. SPAdes
                                  1. No dio resultados. Sólo contigs.

                                    Annotations:

                                    • Los kmer los definió el programa. No los evaluó todos, y los que evaluó, sólo realizó contigs.
                                  2. SOAPdenovo
                                    1. Librerías por separado. K 29, 47, 63. Se escogió el K 63 porque da mejores resultados

                                      Annotations:

                                      • Ver tabla comparativa

                                      Attachments:

                                      1. BLAST local
                                        1. Resultados positivos para el gen Nrt2.1

                                          Attachments:

                              Show full summary Hide full summary

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