PCR

PCR

Tipos
1. PCR punto final
  1. Sensibilidad 100 - 1,000 copias
  2. Especificidad depende de los oligonucleótidos
2. PCR tiempo real
  1. Sensibilidad <10 copias
3. PCR anidada
  1. Alta especificidad
  2. Sensibilidad <10 copias
4. PCR múltiple
  1. Sensibilidad relativa
Validación de Ensayos
1. ETAPA 1
  1. Propósitos
    1. Diagnóstico de infecciones
    2. Epizootiología molecular
    3. Detectar patógenos resistentes a fármacos
    4. Determinación de carga vírica
  2. Precauciones
    1. Falsos positivos
      1. Causados por
        Contaminación cruzada
    2. Falsos negativos
      1. Causados por
        Efecto inhibidor
        Error de pipeteo
  3. ETAPA 2
    1. Controles
      1. Negativo (-)
        Muestra representativa no expuesta al agente
      2. Positivo (+)
        Muestra infectada de forma natural o experimental
      3. Referencia
        Estándar de comparación
        Asegura que el control (-) está infectado
        Usado en métodos de detección
    2. ETAPA 3
      1. Incluye mismo(s)
        Protocólo
        Reactivos
        Controles
      2. Validar por
        OIE (Ward)
        ECR
        Laboratorios Internacionales
      3. Mínimo de 3 muestras
        Proporciona solidez al ensayo
      4. ETAPA 4
        Interpretación de resultados
        Prevalencia en población diana
        Alta --> Falsos positivos
        Baja --> Falsos negativos
        Mantenimiento de los criterios de validación
        Controles --> Interno
        Validación y estimación de solidez
        Pruebas continuas de lab. de referencia
        Confirmar secuencia diana
        Revalidar prueba con otras muestras
    3. Umbral
      1. Muestra pequeña
        Parcialmente válido
        Confirmar por secuenciación
      2. Prueba sin referencia
      3. Sensibilidad y Especificidad (95%)

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