1. Promotor lacZ. El IPTG es un análogo de Lactosa y se usa para regular la expresión de genes
recombinante, (Isopropyl-B-Thiogalactoside ITPG)
2. Promotor de fago T7. Bacterias modificadas para portar el gen de RNA Pol del fago T7 bajo el control
del promotor lac.
Complementación alfa
b-Galactosidasa (gen lacZ), es un homotetrámero.
Cada subunidad tiene dominio N terminal (péptido
alfa) y C terminal (péptido omega)
Homotetrámero
Estructuras cuaternarias
Terminador transcripcional
Partes genéticas al final de
un gen u operón que
hacen que la transcripción
se detenga
1.- Terminadores rho-independientes. secuencias
palindromicas con loops integrados por G-C
2.- terminadores rho-dependientes. Rho es una helicasa
Genes Reporteros
Las proteínas de fusión o proteínas quiméricas formadas a partir de la
traducción de dos o más genes previamente independientes.
A) Proteínas fluorecentes como reporteros. =
Son evidencia directa de transcripción y
traducción
A través de la sustitución de aminoácidos en
proteínas ya conocidas (GFP y RFP) se han mejorado
características como el brillo o la estabilidad y
modificado su espectro de emisión
B) Genes reporteros no fluorecentes
Ejemplos: Gen de la luciferasa (Lux), gen Cloranfenicol acetil
transferasa (CAT), gen de la β-Galactosidasa (β-Gal) y gen
de la β-glucoronidasa (GUS)
Etiquetas de afinidad
Péptido o proteína que se une a un ligando pequeño (Ej. Iones metálicos),
el cual se halla ligado a un soporte sólido. O bien se unen a una proteína
inmovilizada (Ej. Anticuerpo)
Ejemplos de etiquetas de afinidad
Consideraciones sobre el efecto de tags sobre las
proteinas de interes :