La evidencia morfológica y molecular respalda el reconocimiento específico de la extinta Bettongia anhydra (Marsupialia: Macropodidae)

Anotações:

• Holotipo B. anhydra (SAM M3582) se comparó con especímenes representativos de otras especies de Bettogonia.

1. Nomenclatura y taxonomía de grupos familiares
   1. Prideaux (2004) y Predeaux & Warburton (2010)

1. FUR = colección de referencia de la Universidad de Flinders de Australia del Sur; SAM = Museo del sur de Australia (M: colección de mamíferos; P: colección paleontológica); WAM = colección paleontológica del Museo de Australia Occidental; QM = colección de mamíferos del Museo de Queensland.

Anotações:

• Se realizó con pinzas estériles y luego se colocó en un vial estéril marcado.
• Se escogió esta parte porque se encuentra protegida en gran medida de la contaminación al estar dentro de la cavidad nasal.

1. Extracción de ADN
   1. Muestra triturada en polvo y almacenada para su extracción y amplificación
   2. Tampón de digestión ósea
      1. Consistió en
         1. Ditiotreitol 10 mM
         2. Ácido etilendiaminotetraacético 0,48 M
         3. Polvo de proteinasa K 1 mg / ml
         4. Tris 20 mM pH 8.0
         5. 1% Triton X-100
      2. Se añadió un total de 1.500 µl de tampón de digestión ósea al polvo de hueso y se incubó durante la noche a 55ºC con rotación
         1. Se centrifugó a 13.000xg durante 1 minuto

            Anotações:

            • Se realiza con el fin de granular el material no digerido.
      3. Análisis de ADN
         1. Análisis filogenético
            1. Visualización mediante FIGTREE
            2. Verificación mediante TRACER
            3. Mediante el programa filogénetico BEAST
         2. Mediante conjunto de ceebadores diseñados que se dirigen al gen del citocromo b para Bettongia

            Anotações:

            • Conjuntos de cebadores woylie_cytb_139F ACCTTCCAACATTTGAGCCTGATG y woylie_cytb_388R TGAGCCGTAGTAGATTCCTC se usaron para dirigir una región de ~ 200 pares de bases de ADN del citocromo b.
            1. Se completó un volumen de 25L para cada qPCR

               Anotações:

               • Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR). Contiene 12,5 l ABI Potencia SYBR mezcla maestra (Applied Biosystems, Waltham, Massachusetts), 0,4? M de cebador directo y reverso, 8,5 M H 2 O, y 2 µl de extracto de ADN
               1. El ADN de calidad se preparó para una secuenciación de Sanger

                  Anotações:

                  • Se crearon múltiples conjunto de datos de secuencia.