OBJETIVOS GENERALES :
Establecer un marco de referencia
para el estudio de las infecciones
bacterianas de vías respiratorias.
Identificar los principales agentes
etiológicos que producen
infecciones de vías respiratorias.
Revisar los recursos de
laboratorio para el diagnóstico de
las infecciones bacterianas de vías
respiratorias.
ANTECEDENTES: Entre los microorganismos
involucrados en procesos infecciosos de vías
respiratorias, se encuentra; Streptococcus
pyogenes también llamado Estreptococo beta
hemolítico del grupo A de Lancefield. Así como
estreptococos del grupo C, D, Streptococcus
pneumoniae, Arcanobacterium haemolyticum,
Staphylococcus aureus, Neisseria gonorrhoeae,
Corynebacterium diphtheriae, Haemophilus
influenzae tipo b, Bordetella pertussis, Borrelia
vincenti, Fusobacterium sp y Mycobacterium
tuberculosis
Entre los virus tenemos una alta participación de
Adenovirus, Epstein-Barr, Coxsackie A, Herpes simple 1 y 2,
Virus de la Influenza A y B, Parainfluenza, Coronavirus y
Citomegalovirus. Las muestras que se emplean en
infecciones de vías respiratorias incluyen, exudado faríngeo,
exudado nasal, exudado nasofaríngeo, lavado nasal,
aspirado sinusal y esputo entre otras.
En el caso del exudado faríngeo, su indicación se encuentra
dada con el fin de realizar la detección del microorganismo
involucrado en el proceso infeccioso de la región. Sin embargo,
debemos considerar que siendo una región altamente colonizada
por microorganismos que forman parte de la flora habitual, la
realización de la toma de muestras debe ser la adecuada para
la recuperación y cultivo de los microorganismos involucrados en
el proceso infeccioso.
DESARROLLO DE LA
PRÁCTICA : El profesor de
laboratorio conjuntamente
con los alumnos revisará un
caso clínico de infección de
vías respiratorias e
identificarán: a) Datos
relevantes del caso. b)
Posibles diagnósticos
clínicos. c) Productos
biológicos empleados para el
diagnóstico de laboratorio.
MATERIAL
1.Placa de
gelosa sangre
2. Placa de
gelosa sal
manitol 3.
PlacaBiggy 4.
Hisopos
estériles
5.Abatelenguas
estériles 6.
Asas
bacteriológicas
7. Mecheros . 8.
Equipo de
Tinción de
Gram 9.Papel
seda 10. Caso
clínico
.1. Para realizar el
aislamiento de las
bacterias del exudado
faríngeo, se marcan las
zonas de inoculación en
cada medio de cultivo
MÉTODO
2. Toma de muestra: se le
pide al paciente que abra
bien la boca, se hace
descender suavemente la
lengua con el abatelenguas
y se introduce un hisopo
estéril hacia la faringe
posterior. Pasar suave y
rápidamente el hisopo con
movimientos hacia arriba y
abajo por detrás de la úvula
y entre los pilares
tonsilares
3. Rotar el hisopo en la zona
número uno de la placa de gelosa
sangre y agar sal manitol. Además
frotarlo en la superficie del medio
de Biggy y finalmente hacer un
frote e.n una laminilla
4. Continuar con la
distribución de la
muestra empleando
el asa bacteriológica
previamente
esterilizada con el fin
de lograr el
aislamiento deseado.
5. Incubar los cultivos
a 37° C. durante 24 a
48 horas
6. Fijar y teñir el frote
con el método de Gram
7. Observar al
microscopio
Sesión II: (Identificación
macroscópica y microscópica)
1. Cultivos demostrativos 2.
Cultivos de la práctica anterior
3. Equipo de tinción de Gram 4.
Laminillas 5. Cubreobjetos 6.
Asas bacteriológicas 7.
Mecheros 8. Microscopio 9.
Aceite de inmersión 10. Papel
para la limpieza del
microscopio
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
DEMOSTRATIVAS
1.Determinación de hemólisis
2. Prueba de CAMP 3.
Bacitracina 4. Optoquina 5.
Realizar determinación
serológica en caso de
probable Streptococcus
pyogenes
INTERPRETACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROSCÓPICA.
Gelosa sangre: Observar la morfología colonial,
determinar el tipo de hemólisis (Alfa, Beta o Gamma) 2.
Agar sal manitol: Medio que permite observar la
capacidad de fermentación del manitol por parte de
Staphylococcus aureus. El indicador hará un vire en el
medio de cultivo hacia el color amarillo en caso positivo. Si
no hay cambio en la coloración lo consideramos negativo.
3. Medio Biggy: Las colonias que se observen de color café
obscuro o negro, corresponden a Candida. 4. El halo de
inhibición de bacitracina será positivo para estreptococo
del grupo A. 5. Prueba de CAMP Permite diferenciar
estreptococo beta hemolítico. Es negativa para
Streptococcus pyogenes y positiva en caso de
Streptococcus agalactiae
Es importante su realización con el
fin de orientar el tratamiento y
pronóstico de infecciones producidas
por Streptococcus pyogenes 1.Colocar
una gota de una suspensión de
colonias aisladas de una placa. 2.
Añadir igual cantidad de antisuero
SBGA. 3. Mezclar y leer a los dos
minutos contra fondo obscuro. 4. En
otro pozo de la placa de aglutinación
realizar la prueba de control
negativo. 5. Comparar resultados.
INTERPRETACIÓN
La presencia de
grumos indica
SBGA. Esta prueba
puede hacerse
directamente del
exudado faríngeo, lo
que permite
realizar el
diagnóstico rápido.
Sin embargo, los
resultados
negativos deben ser
comprobados por el
cultivo
CASO CLÍNICO
(Relación del caso
clínico con la
práctica)
FICHA DE DATOS Nombre: Mario Martínez Tapia
Edad: 20 años Escolaridad: 2do año de licenciatura
Lugar de origen: México D.F, Coyoacán, México D.F
Ocupación: estudiante
Paciente masculino de 20 años acude al servicio
de admisión, Continua en el hospital centro
médico siglo XXI, por presentar desde hace 2
semanas fiebre de 39°c, acompañado de
anorexia, astenia y adinamÍa.
Padecimiento actual: Inicio su padecimiento hace 2
semanas con presencia de fiebre de 39° acompañado de
anorexia, astenia y adinamia, con presencia de “ardor de
garganta”, refiere la aparición de “unas bolitas” localizadas
en la región preauricular no dolorosas. Comenta que ha
presentado en 2 ocasiones vomito de contenido gástrico.
Masculino de 20 años de edad aparente a la
cranologica, en malas condiciones generales, consiente,
ubicado en tiempo, lugar y persona.Cavidad oral y
faringe: eritema del paladar blando, úvula y faringe
posterior. Torax y mov. De amplexión y amplexación
simétricos. Murmullo vesicular, presente. Adecuada
transmición de la voz. Claro pulmonar a la percusión,
no se integra Sx Pleuropulmonar, ruidos cardiacos
rítmicos de buen tono con adecuada intensidad y
frecuencia.
EXUDADO FARÍNGEO - CULTIVO EN AGAR SANGRE- MUESTRA B HEMÓLISIS
TRATAMIENTO: SE REALIZA UN ANTIBIOGRÁMA PARA ELEGIR EL ANTIMICROBIANO (ANTIBIÓTICO) MÁS EFICÁZ
COCOS - BACTERIAS GRAM +
B HEMOLÍTICOS O DEL GRUPO A
serología (
indentificación de
serotipos ): S.pyogenes
del Grupo A
CONCLUSIONES: En el cultivo obtenido por el exudado
faríngeo realizado al paciente nos dio muestras muy
diferentes en los tres cultivos que teníamos (agar
sangre, sal manitol y biggy). Con tan sólo un período
de incubación de dos días en el agar sangre se
obtuvieron colonias muy marcadas pero de la cual no
se distinguió una β-hemolisis característica del
estreptococos pyogenes. En el medio de sal manitol se
observó unas pequeñas colonias, acumulándose éstas
en tan sólo un lugar específico del agar. A diferencia
de estos dos medios, en el agar biggy no se observó el
crecimiento de alguna colonia.
De los dos primeros medios se tomaron
muestras a las que se les realizaron la tinción de
gramm. En ambas se lograron observar colonias
de cocos gramm positivos agrupados en cadenas
en forma de collar de perlas. Con todo éste
procedimiento se observó una población de
bacterias características de las vías aéreas
superiores, el cual todas las personas poseen y no
es característica de algún proceso patógeno o de
algo con relevancia clínica.