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Descrição
Mapa Mental por Milton David Pinzon Lopez, atualizado more than 1 year ago
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Criado por Milton David Pinzon Lopez
mais de 7 anos atrás
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TECNICAS DE EXTRACCIÓN DE ADN
- ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido desoxirribonucleico) son polímeros
especializados en almacenar, transmitir y expresar la información genética
- se debe considerar
- Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas formadas por un numeroso grupo de
compuestos químicos llamados nucleótidos. Estas cadenas forman una estructura (deescalera retorcida) que
se llama doble hélice. Cada nucleótido está formado por tres unidades: unamolécula de azúcar llamada
desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestosnitrogenados llamados bases: Adenina
(abreviada como A), Guanina (G), estas son Purinas, Timina(T) y Citosina (C), estas son pirimidínicas
- INCUBACIÓN DEL LISADO PARA SU USO
- incuba el lisado crudo a temperaturas entre 90 – 100 ºC mediante este
método el ADN obtenido es de muy baja pureza y con aplicaciones muy
reducidas.INCUBACIÓN DEL LISADO PARA SU USO
- desventaja de este método son las pérdidas de ADN por acción de las
nucleasas y otros componentes de los orgánulos que están en
contacto con el ADN y pueden destruirlo,
- desventaja de este método son las pérdidas de ADN por acción de las
nucleasas y otros componentes de los orgánulos que están en
contacto con el ADN y pueden destruirlo,
- incuba el lisado crudo a temperaturas entre 90 – 100 ºC mediante este
método el ADN obtenido es de muy baja pureza y con aplicaciones muy
reducidas.INCUBACIÓN DEL LISADO PARA SU USO
- INCUBACIÓN DEL LISADO PARA SU USO
- Cada molécula de ADN está constituida por dos cadenas o bandas formadas por un numeroso grupo de
compuestos químicos llamados nucleótidos. Estas cadenas forman una estructura (deescalera retorcida) que
se llama doble hélice. Cada nucleótido está formado por tres unidades: unamolécula de azúcar llamada
desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestosnitrogenados llamados bases: Adenina
(abreviada como A), Guanina (G), estas son Purinas, Timina(T) y Citosina (C), estas son pirimidínicas
- se debe considerar
- MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE ADN CON YODURO DE SODIO COMO
AGENTE CAOTRÓPICO EN UN ÚNICO TUBO
- la extracción se realiza en un único micro tubo de centrifugado. El
yoduro de sodio además de provocar la lisis celular rompe la capa de
hidratación que rodea el ADN, logra que las cargas negativas de los
grupos fosfatos del ADN queden más expuestas.
- ventajas reactivos que permiten separar las
proteínas y lípidos contenidos en las muestras
biológicas del ADN.
- ventajas reactivos que permiten separar las
proteínas y lípidos contenidos en las muestras
biológicas del ADN.
- la extracción se realiza en un único micro tubo de centrifugado. El
yoduro de sodio además de provocar la lisis celular rompe la capa de
hidratación que rodea el ADN, logra que las cargas negativas de los
grupos fosfatos del ADN queden más expuestas.
- EXTRACCIÓN CON GRADIENTES DE CLORURO DE CESIO –
BROMURO DE ETIDIO
- se lleva a cabo el lisado celular por métodos mecánicos o químicos y la mezcla es
centrifugada durante varias horas en presencia de bromuro de etidio, asi se pueden
visualizar las diferentes capas en las que se agrupan los ácidos nucleicos según su
densidad con luz ultravioleta. Se obtienen varias capas que pueden separarse y recuperar
el ADN purificado.
- desventajas: es largo, imposible de automatizar,
caro, requiere una ultracentrífuga y usa
compuestos químicos tóxicos.
- desventajas: es largo, imposible de automatizar,
caro, requiere una ultracentrífuga y usa
compuestos químicos tóxicos.
- se lleva a cabo el lisado celular por métodos mecánicos o químicos y la mezcla es
centrifugada durante varias horas en presencia de bromuro de etidio, asi se pueden
visualizar las diferentes capas en las que se agrupan los ácidos nucleicos según su
densidad con luz ultravioleta. Se obtienen varias capas que pueden separarse y recuperar
el ADN purificado.
- INTERCAMBIO ANIÓNICO PARA LA
EXTRACCIÓN DE ADN DEL LISADO CELULAR
- interacción hace que las moléculas de ADN queden retenidas en la fase estacionaria
de la columna y puedan separarse de las proteínas y demás metabolitos presentes.
Luego con la concentración de sales a la fase móvil se logra eludir el ADN,
- ventaja de evitar el uso de disolventes orgánicos tóxicos
y es más simple que los que requieren precipitación de
otros componentes para su separación del ADN.
- ventaja de evitar el uso de disolventes orgánicos tóxicos
y es más simple que los que requieren precipitación de
otros componentes para su separación del ADN.
- interacción hace que las moléculas de ADN queden retenidas en la fase estacionaria
de la columna y puedan separarse de las proteínas y demás metabolitos presentes.
Luego con la concentración de sales a la fase móvil se logra eludir el ADN,
- USO DE MATRICES CELULÓSICAS PARA LA EXTRACCIÓN
DEL ADN DE MUESTRAS BIOLÓGICAS
- usado en investigaciones forenses consiste en impregnar una matriz de
celulosa con productos químicos que permitan la lisis celular y posterior
conservación del ADN.
- muy útil para la resolución de casos forenses y también tiene utilidad
para la determinación de especies en un fluido corporal como puede
ser un virus o una bacteria.
- muy útil para la resolución de casos forenses y también tiene utilidad
para la determinación de especies en un fluido corporal como puede
ser un virus o una bacteria.
- usado en investigaciones forenses consiste en impregnar una matriz de
celulosa con productos químicos que permitan la lisis celular y posterior
conservación del ADN.
- USO DE RESINAS DE INTERCAMBIO IÓNICO
- El uso de resinas hidrocarbonadas con estructuras rígidas en tres
dimensiones permite que la superficie se encuentre cargada con alguna
sustancia como el dietilaminoetilo que puede protonarse en medio ácido
y quedar cargado positivamente por lo que interacciona con los grupos
fosfatos del ADN.
- inconveniente que se aíslan cadenas sencillas de ADN, y
este no puede ser utilizado por ejemplo para el análisis
de la variación de polimorfismos en fragmentos de
restricción
- inconveniente que se aíslan cadenas sencillas de ADN, y
este no puede ser utilizado por ejemplo para el análisis
de la variación de polimorfismos en fragmentos de
restricción
- El uso de resinas hidrocarbonadas con estructuras rígidas en tres
dimensiones permite que la superficie se encuentre cargada con alguna
sustancia como el dietilaminoetilo que puede protonarse en medio ácido
y quedar cargado positivamente por lo que interacciona con los grupos
fosfatos del ADN.
- USO DE LA PROTEINASA K Y EL DODECILSULFATO DE SODIO
- Es uno de los más usados para la extracción de ADN ya que la digestión de la
muestra se puede realizar con proteinasa K que es activada por el dodecil sulfato de
sodio.
- usada para la digestión de las proteínas y otros
contaminantes del lisado celular.
- usada para la digestión de las proteínas y otros
contaminantes del lisado celular.
- Es uno de los más usados para la extracción de ADN ya que la digestión de la
muestra se puede realizar con proteinasa K que es activada por el dodecil sulfato de
sodio.
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