Genele de clasa I:
codifică pentru toate tipurile de ARNr;
un promotor asigură transcrierea unui grup de gene;
la om sunt localizate în cromozomii 13, 14, 15, 20, 21;
la om sunt lipsite de introni;
se repetă de mai multe ori în acelaşi cromozom
Genele pentru ARNt la eucariote:
sunt transcrise de ARN-polimeraza III;
formează unităţi transcripţionale multigenice;
sunt transcrise în citozol;
diferite unităţi transcripţionale se deosebesc prin numărul şi tipul genelor;
promotorii se supun transcripţiei.
Caracteristica genelor la procariote:
promotorii sunt recunoscuţi direct de ARN-polimeraze;
boxa Pribnow este responsabilă de interacţiunea cu ADN- polimeraza;
genele sunt transcrise de o singură ARN-polimerază;
genele pentru ARNt şi ARNr formează unităţi transcripţionale mixte;
genele nu conţin introni.
Caracteristica genelor structurale la procariote:
frecvent sunt organizate în unităţi policistronice;
genele participante într-un lanţ metabolic sunt dispuse alături;
unităţile transcripţionale, concomitent cu gene structurale, conţin şi gene pentru ARNt şi ARNr;
secvenţa operatoare este localizată în regiunea terminatorului;
sunt transcrise de o singură ARN-polimerază.
Caracteristica genomului uman:
practic toate celulele somatice conţin aceeaşi informaţie ereditară;
majoritatea ADN este localizat în nucleol;
ADN-satelit reprezintă gene repetitive;
numărul de gene în cromozomi este diferit;
numărul de gene active diferă în diferite ţesuturi.
Familiile de gene repetitive:
Au provenit prin duplicaţia unei gene ancestrale;
drept exemplu pot servi genele pentru ARNr 5S;
au aceeaşi structură;
diferiţi membri ai familiei exercită aceeaşi funcţie, dar au secvenţe diferite;
de obicei, sunt în exces.
Familiile de gene nerepetitive se caracterizează prin:
drept exemplu pot servi genele pentru ARNr;
fiecare membru are particularităţi distincte;
structura şi funcţiile tuturor membrilor sunt identice;
diferiţi membri se pot activa în perioade diferite ale ontogenezei;
pot conţine pseudogene.
Particularităţile genomului mitocondrial uman:
conţine puţine secvenţe necodificatoare;
genele structurale codifică proteine ale metabolismului energetic;
replicarea ADN mitocondrial, de obicei, are loc la începutul fazei S a ciclului celular;
conţine doar două gene pentru ARNr: 18S şi 28S;
conţine gene ce codifică pentru enzimele implicate în replicaţie şi transcripţie.
Caracteristica genelor mitocondriale la om:
au specificitate de ţesut;
formează unităţi transcripţionale multigenice mixte;
genele structurale sunt separate prin gene pentru ARNt;
particularităţile codului genetic mitocondrial permit descifrarea a 61 codoni cu ajutorul a 22 tipuri ARNt;
la om cea mai lungă secvenţă necodificatoare este reprezentată de promotori;
Elementele genetice migratoare se caracterizează prin:
frecvenţa de transpoziţie este influenţată de diverşi factori;
sunt specifice pentru procariote, în timp ce la om lipsesc;
inserţia în poziţie nouă poate perturba activitatea genelor vecine;
pot determina apariţia mutaţiilor;
pot să determine crossing-overul inegal
Silencerii:
sunt secvenţe caracteristice pentru procariote;
interacţionează cu proteinele ataşate la terminator;
diminuează rata de interacţiune a ARN-polimerazei cu elementele reglatoare ale genei;
pot fi situaţi în faţa promotorului sau după terminator;
pot fi localizaţi la distanţă diferită de genă
ADNc reprezinta
ADN celular
ADN ce contine introni
ADN fara introni
ADN genomic
Molecula hibrida
La sinteza ADNc se utilizeaza enzima
Taq-polimeraza
Reverstranscriptaza
Primaza
Telomeraza
Topizomeraza
Hibridarea acizilor nucleici in vitro
Este conditionata de formarea legaturilor fosfodiesterice
Consta in unirea a doua molecule bicatenare
Este conditionata de complementaritatea bazelor azotate
Reprezinta hidroliza legaturilor de hidrogen
Este o etapa obligatorie in clonarea ADN
Hibridizarea moleculara reprezinta
Formarea heteroduplexelor de ADN
Alungirea ADN monocatenar
Proceul de denaturare a moleculelor de ADN
Sinteza complementara a ARN
Procesul de reparare a ADN-lui
In calitate de matrita pentru sinteza ADNc se utilizeaza
ADN genomic extras din limfocitele umane
ADN bicatenar marcat radioactiv
O secventa de nucleotide sintetizata in vitro
Fragmente de ADN clonat
O molecula de ARNm
Hibridizarea moleculara in cazul analizei Southern-blot reprezinta
Procesul de topire a ARN
Procesul de topire a ADN-lui bicatenar
Procesul de formare a structurilor bicatenare a ADN:fragment de restrictie-sonda
Sinteza ARN pe matrita de ADN
In calitate de gazda de clonare NU sunt utilizate
Celulele bacteriene
Celulele animale
Plasmidele
Celulele vegetale
Celulele drojdiilor
Moleculele de ADN recombinat obtinute in vitro
Sunt lipsite de punctul ORI
Pot fi multiplicate numai in vitro
Se obtin cu ajutorul restrictazelor si ligazelor
Constau doar din ADN vector
Intreaga molecula are aceeasi origine
Prin metoda autoradiografiei se vizualizeaza
Fragmente de ADN marcate radioactiv
Fragmente de ADN colorate cu bromura de ethidium
Fragmente de ADN numai de o lungime
Fragmente de ARN
Fragmente de ADN cu lungime redusa
Hibridarea in situ NU determina
Gena dintr-un cromozom
Numarul exact al moleculelor de ARNm dintr-un tesut
ADN viral
Numarul de organizatori nucleolari
Deletiile cromozomiale submicroscopice
In calitate de vector de clonare se utilizeaza
ADNc
ADN plasmidic
ADN modificat al adenovirusului
Vectorii de clonare
Se sintetizeaza cu ajutorul ARN-polimerazelor
Sunt raspanditi in natura
Contin situsuri de replicare autonoma
Se utilizeaza pentru identificarea ADN-complementar
Transfera fragmente de ADN strain
Indicati etapele clonarii ADN in vivo
Restrictia si selectia fragmentelor pentru multiplicare
Restrictia vectorului de clonare
Ligarea ADN vector si a fragmentului de ADN de interes
Schimbarea ciclica a regimului de temperatura
Transferul moleculelor recombinate in celula gazda
Determinarea succesiunii nucleotidelor in gena este necasara pentru
A cunoaste functia genei si reglarea activitatii ei
Sinteza primerilor pentru PCR
Elaborarea metodelor pentru depistarea mutatiilor
Elaborarea metodelor terapiei genice
Studierea histologica a celulelor modificate
In calitate de vector pentru clonarea ADN se utilizeaza
Plasmide
Cosmide
Fagi
Bacterii
Etapele clonarii in vivo sunt
Obtinerea fragmentului de interes pentru clonare
Selectia vectorului de clonare si digestia cu restrictaze
Obtinerea ADN recombinat
Hibridizarea specifica a ADN genomic cu ADN-primeri
Transferul ADN recombinat in celula gazda
Se formeaza prin reverstranscriptie
Contine numai regiuni codificatoare ale genei
Este o copie exacta a genei la eucariote
Este o copie a ARN mesager
Este utilizat pentru identificarea genelor
Hibridizarea in situ a acizilor nucleici
Se efectueaza pe preparate histologice sau cromozomiale
Nu se utilizeaza pe preparate arhivate
Este determinata de specificitatea sondei ADN pentru un anumit cromozom
Permite identificarea nivelului de exprese a genei in tesut
Determina ARNm intr-o celula particulara
Etapele de extragere a ADN sunt
Lizarea celulelor cu detergenti
Hidroliza proteinelor
Precipitarea in alcool de 70% si pastrarea la -20 grade C
Purificarea cu cloroform si fenol
Separarea membranelor celulare prin centrifugare
