extracción del ADN

Flussdiagrammknoten

• Extracción del ADN del liquido amniótico

• Amniotico (binary/octet-stream)

• La muestra(LA) es congelada en un tubo de Eppendorf

• Sacado+Del+Tubo (binary/octet-stream)

• centrifuga a 7000 RPM/ 5M

• Centrifuga (binary/octet-stream)

• Se retira el eppendorf de la centrifuga

• Se descarta el sobrenadante

• Desacarte+De+Sobrenadante (binary/octet-stream)

• Se obtiene el pele de células que es en donde esta el ADN

• En el tubo de Eppendorf se colocan 700 microlitros de solución de lisis 

• Esta solución rompe la membrana celular y nuclear 

• mezclar en vortex, para mejor acción del buffer

• Lisis (binary/octet-stream)

• Vortex (binary/octet-stream)

• La mezcla de lisis contiene proteinasa k

• Para que actué se somete a 56°C/ 1Hora en una incubadora 

• Porteinas+K (binary/octet-stream)

• 56°C (binary/octet-stream)

• Pasado el tiempo de incubación se colocan 500 microlitros de fenol cloroformo alcohol isoamílico

• Con lo anterior se forman dos fases: Inferior orgánica, superior DNA 

• Cloroformo (binary/octet-stream)

• Dos+Faces (binary/octet-stream)

• Resuspender o mezclar por inmersión durante 10 minutos

• Luego se centrifuga a 13.000 RPM/ 10 minutos

• Resuspender (binary/octet-stream)

• Mezclar+En+Centrifuga (binary/octet-stream)

• Pasados los 10 minutos, podemos observar tres fases, en donde la capa del medio es la de proteínas

• Retiramos por medio de una pipeta el sobrenadante donde esta el DNA y se pasa a un tubo de Eppendorf nuevo

• Tresfases (binary/octet-stream)

• Tubo+Tres (binary/octet-stream)

• Se hace un nuevo lavado con FC AI hasta que no aparezca la fase de proteínas

• Luego debemos precipitar el DNA, para esto se usa 500 microlitros de isopropanol y centrifuga

• Cuando ya lo centrifugamos, se descarta el sobrenadante y en la parte inferior del tubo se observa el DNA

• Luego se suspende en agua miliquiu para mantenerlo para próximos procedimientos

• Precipitar (binary/octet-stream)

• Mezclar+En+Centrifuga (binary/octet-stream)

• Fondo+Del+Tubo (binary/octet-stream)