Práctica 7

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• Práctica 7: ESTUDIO DE LOS PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS A SER APLICADOS EN MUESTRAS AMBIENTALES

• PARTE I Reconocimiento de los parámetros cromatográficos en cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE).

• Definir y explicar cómo se relacionan los siguientes conceptos

• Factor de separación

• Resolución 

• Eficiencia

• Factor de retención

• Tiempo de retención

• Tiempo muerto

• Ancho de banda (sigma total)

• Cromatografía líquida en fase normal

• Cromatografía líquida en fase reversa

• Gradiente de elución

• Elución isocrática

• PARTE II Efecto de la estructura de los compuestos (solutos) y de la composición de la fase móvil sobre la retención y la resolución

• Dibujar estructuras de los siguientes compuestos utilizando las convenciones de cuña/slash representando los ángulos de enlace adecuados

• Acetofenona Benzofenona EtilparabenoButilparabenoPropiofenona PropilparabenoKetoprofeno 3-nitrofenol 4-nitrofenol

• Sobre la base de sus estructuras

• a) Predecir el orden de elución de los compuestos, partiendo del menos al más retenido en RPLC (Cromatografía líquida en fase reversa). Justificar su respuesta.

• b) ¿Cuáles son los principales usos de cada uno de estos compuestos?

• 3. Ejecutar el HPLC simulator (http://www.hplcsimulator.org/)

• Configurar el simulador según las características descritas en la Tabla 19.

• Registrar en la Tabla 20 y para cada compuesto: 

• el tiempo de retención (tR), el factor de retención (k’) y el ancho de banda (sigma total). Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.

• Registrar en la tabla 20 Resultados primera configuración del HPLC Simulator

• Cambie la composición de la fase móvil de metanol a acetonitrilo como se muestra en la Tabla 21

• Registrar en la Tabla 22 y para cada compuesto:

• El tiempo de retención (tR), el factor de retención (k’) y el ancho de banda (sigma total), obtenidos con el cambio de disolvente. Adjuntar una imagen del cromatograma obtenido.

• Explicar por qué se da el cambio en los tiempos de retención y en la separación de los compuestos cuando el metanol es sustituido por el acetonitrilo

• ¿En qué caso se obtiene una mejor separación?

• ¿Cuál es la importancia del agua en la composición de la fase móvil?

• Calcular y reportar en la Tabla 23, la diferencia en los cambios de energía libre (ΔΔG) para la retención de los solutos en las fases móviles MeOH/Agua 50/50 y ACN/Agua 50/50, según las ecuaciones en la guía

• ¿Cuáles solutos poseen las diferencias más grandes y más pequeñas en la energía libre asociada a la retención, comparando las fases móviles MeOH/Agua (50/50) y ACN/Agua (50/50)? 

• Elaborar una conclusión sobre el efecto de la estructura de los solutos y la composición de la fase móvil sobre la retención y la resolución

• PARTE IIIEfecto del porcentaje del modificador en la composición de la fase móvil sobre la retención y la resolución.  

• En el listado de compuestos, eliminar 7 solutos dejando solo a acetofenona y etilparabeno

• Fijar las condiciones del simulador de acuerdo con la Tabla 24

• Registrar en la Tabla 25 y para cada compuesto: el tiempo de retención (tR), el factor de retención (k’) y el ancho de banda (sigma total)

• Adjuntar una imagen del cromatograma obtenido

• Cambiar gradualmente el porcentaje de metanol en intervalos de 10% iniciando en 95% y terminando en 5% (95%, 85%, 75%,…, 5%) y registrar en la Tabla 26 y para cada compuesto:

• El tiempo de retención (tR), el factor de retención (k’) y el ancho de banda (sigma total). Adjuntar una imagen del cromatograma obtenido.

• Repetir el mismo proceso cambiando el metanol por acetonitrilo y registrar los resultados en la Tabla 27

• Elaborar una conclusión sobre el efecto del porcentaje modificado en la composición de la fase móvil sobre la retención y la resolución

• Si fuera contratado en un laboratorio para separar (empleando cromatografía líquida) una mezcla los compuestos acetofenona y etilparabeno 

• ¿cuál sería la mejor composición de fase móvil a emplear? Justificar la respuesta