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Beschreibung
Mindmap von Daniela Monroy, aktualisiert more than 1 year ago
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Erstellt von Daniela Monroy
vor fast 8 Jahre
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DNA cromosomal
- "Purificación Salina"
- Pasos
- 1. Lisis
celular
- Mediante un detergente
aniónico en presencia de
conservantes y tratamiento con
RNAsa
- 2. Se eliminan proteínas y
contaminantes celulares
- Mediante precipitación salina
- 3. Aislamiento de DNA
genómico
- Precipitación en presencia de
alcohol y se disuelve en agua o slc.
conservante
- Precipitación en presencia de
alcohol y se disuelve en agua o slc.
conservante
- Mediante precipitación salina
- Mediante un detergente
aniónico en presencia de
conservantes y tratamiento con
RNAsa
- 1. Lisis
celular
- Pasos
- Aislamiento
- 1. Preparación de
muestras
- Muestra fresca o
congelada, se guardaran
10 mL de la muestra en
congelación hasta su uso
- 2. Lisis
celular
- Añadir 0.5 mL de suspeción
bacteriana en un tubo
eppendorf
- Centrifugar a 13.000–16.000
g durante 5 segundos.
Eliminar el máximo posible
de sobrenadante
- -Añadir 300 µl de la solución de lisis
y pipetear suavemente hacia arriba
y hacia abajo hasta que las células
queden resuspendidas de nuevo.
- Incubar la muestra a 80 ºC
durante 5 minutos para lisar
las células.
- Enfriar la muestra hasta temperatura ambiente.
- Enfriar la muestra hasta temperatura ambiente.
- Incubar la muestra a 80 ºC
durante 5 minutos para lisar
las células.
- -Añadir 300 µl de la solución de lisis
y pipetear suavemente hacia arriba
y hacia abajo hasta que las células
queden resuspendidas de nuevo.
- Centrifugar a 13.000–16.000
g durante 5 segundos.
Eliminar el máximo posible
de sobrenadante
- 3. Digestión de RNA
- Añadir 1.5 µl de la solución de RNAsa A
al lisado celular. Mezclar bien la
muestra, invirtiendo el tubo 25 veces.
Incubar a 37 ºC durante 15–60 minutos.
- 4. Precipitación de
proteínas
- Enfriar la muestra hasta temperatura
ambiente. Añadir 100 µl de la solución de
precipitación de proteínas al lisado celular
previamente tratado con RNAsa y agitar
vigorosamente durante 20 segundos, y
centrifugar a 13.000–16.000 g durante 3
minutos.
- 5. Precipitación de DNA
- Decantar el sobrenadante (que
contiene el DNA) a un tubo
Eppendorf de 1’5 ml que
contenga 300 µl de isopropanol
puro
- Mezclar la muestra y centrifugar
a 13000-16000 x 1 min
- Eliminar el sobranadante por decantación
- Añadir 300 µl de etanol al 70%. Invertir el tubo varias veces
- Centrigugar a 13000-16000 x 1 min,
posteriormente eliminar el EtOH
por decantación
- Escurrir el tubo en papel absorbente y dejar secar la muestra
- Escurrir el tubo en papel absorbente y dejar secar la muestra
- Centrigugar a 13000-16000 x 1 min,
posteriormente eliminar el EtOH
por decantación
- Añadir 300 µl de etanol al 70%. Invertir el tubo varias veces
- Eliminar el sobranadante por decantación
- Mezclar la muestra y centrifugar
a 13000-16000 x 1 min
- 6. Hidratación de DNA
- Añadir 50 µl de la solución de
hidratación del DNA
- Rehidratar el DNA a T amb
durante toda la noche / Calentar a
65°C x 1 hr
- Guardar el DNA de 2-8°C hasta sy
uso
- Guardar el DNA de 2-8°C hasta sy
uso
- Rehidratar el DNA a T amb
durante toda la noche / Calentar a
65°C x 1 hr
- Añadir 50 µl de la solución de
hidratación del DNA
- Decantar el sobrenadante (que
contiene el DNA) a un tubo
Eppendorf de 1’5 ml que
contenga 300 µl de isopropanol
puro
- Enfriar la muestra hasta temperatura
ambiente. Añadir 100 µl de la solución de
precipitación de proteínas al lisado celular
previamente tratado con RNAsa y agitar
vigorosamente durante 20 segundos, y
centrifugar a 13.000–16.000 g durante 3
minutos.
- Añadir 1.5 µl de la solución de RNAsa A
al lisado celular. Mezclar bien la
muestra, invirtiendo el tubo 25 veces.
Incubar a 37 ºC durante 15–60 minutos.
- Añadir 0.5 mL de suspeción
bacteriana en un tubo
eppendorf
- Muestra fresca o
congelada, se guardaran
10 mL de la muestra en
congelación hasta su uso
- 1. Preparación de
muestras
- Visualización en gel de agarosa
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