Chromatografie

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Nele Kutter
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Nele Kutter
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Trennmechanismen Verteilung Ionische WW Bioaffinität Adsorption Größenausschluss Chirale Trennung
Normalphase vs Umkehrphase Kieselgel, Al2O3 Cyanopropyl- Aminopropylgruppen Organosilane, C18 + Endcapping durch TMCS
Elutionsreihe Hexane, arom Alkohole, Ether, Chloroform, 1,2-Dichlormethan, Aceton, Ethylacetat, Acetonitril, aliph. Alkohole, Essigsäure, Wasser, Puffer
Selektivität alpha=k1/k2 immer >1
Auflösung Rs=1,18 * dtr/(wh1+wh2) wie gut getrennt?
Bodenzahl N=5,54* [tr/wh]^2 Trennstufenhöhe H=L/N
Kapazitätsfaktor Retentionsfaktor k=tr/tm
Peaksymmetrie As= w0,05/2x halbe peakbreite >1 tailing <1 fronting
Welche drei Theorien werden genutzt, um die Chromatographie wissenschaftlich zu „verstehen“? Was sind die grundlegenden Inhalte einer jeden? Trennböden: Interaktionen des Analyten mit der stationären Phase. charakterisiert durch Bodenzahl und die Bodenhöhe. optimal: hohe Trennbodenzahl, niedrige Trennbodenhöhe Kinetische Theorie: unterschiedliche Retention-> unterschiedliche Elutionsgeschwindigkeiten, zeitlichen Reihenfolge Dynamische Theorie :betrachtet Massentransfer und Diffusionsvorgänge. verknüpft Trennstufenhöhe mit der Strömungsgeschwindigkeit der mobilen Phase. Van Deemter Gleichung: H=A+B/ux+C*ux H: Bodenhöhe A: Eddy Diffusion B: Longitudinaldiffusion (Eigenbewegung der Teilchen in alle Richtungen) C: Massentransfer(Unterschiedliche Stoffe brauchen Unterschiedliche Zeit für Wechselwirkung mit Stat.Phase)
inneres Chromatogramm Elutionsreihenfolge anhand Wegstrecke
äußeres Chromatogramm zeitliche Elutionsreihenfolge
HPLC Detektoren Brechungsindex (nur isokratisch) UV/Vis Fluoreszenz elektrochemisch Leitfähigkeit Massenselektiv
Hochdruckgradient HPLC vs Niederdruckgradient HPLC Hochdruckgradient: Mischung durch Gradientenmischer nach den Pumpen. Niederdruckgradient: Mischung erfolgt vor der Pumpe.
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