Hemaglutinación pasiva

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Flowchart on Hemaglutinación pasiva, created by MARCOS ROLANDO POCON TEPEU on 08/09/2021.
MARCOS ROLANDO POCON TEPEU
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Resource summary

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  • Método por el cual las particulas o células están recubiertas por antigenos con el fin de determinar la presencia de anticuerpos de una determinada patología  
  • En este tipo de prueba las particulas son transportadoras del antigeno 
  • ¿Que tipo de muestra se utiliza?
  • Células sanguíneas (pollo, ave) Las células están sensibilizadas con un antígeno
  • ¿Cual es el fin de la practica ?
  • Determinar la presencia de anticuerpos  contra el Treponema Pallidum (sifilis).
  • Procedimiento para la reacción
  • 1. Preparación de materiales 
  • Incluidos en el kit 
  • Diluyente (diluye tanto controles y muestras)
  • Control negativo y positivo
  • No incluidos en el kit
  • Eritrocitos (no sensibilizados, no tienen superficie el antígeno) sirven verificar el suero del px no tienen anticuerpos
  • Los eritrocitos sensibilizados (tienen superficie antigeno treponema pallidum) detectar suero px anticuerpos contra el treponema pallidum
  • Micropipeta  Tips para micropipeta 
  • 2. Rotule la placa con el siguiente titulo (control positivo / negativo) 
  • Placa para muestras 
  • ¿que tipo de prueba se implementara?
  • prueba semicuantitativa porque se trabajan diluciones. es decir si una muestra de suero es + entonces a esa muestra se le siguen haciendo diluciones para determinar el titulo ala que es reactiva.
  • 3. Verifique que la micropipeta tenga la capácidad de servir 25 microlitros de diluyente 
  • 4. servir el diluyente en todos los pocillos hasta una dilución tentativa, se sirve aproximadamente hasta una dilución 1/32
  • Recomendación sirva primero el diluyente para así no tener contaminación con la muestra.
  • tome en cuenta que Las diluciones en esta prueba son seriadas , es decir que de una dilución se realizan las demás diluciones
  • 5. Se comenzara con una dilución 1 / 2 
  • Recomendacio no generar burbujas ala hora de servir para que el reactivo quede al fondo de la placa 
  • 6. servir los reactivos control comenzando con el control + y tomando 25 microlitros para depositarlo en los pocillos de la primera fila con la pipeta 
  • 7. revolver bien el control y diluyente 
  • A PARTIR DE AQUI YA SE PUEDEN REALIZAR LAS DILUCIONES
  • 8. con la misma pipeta que ha servido el control positivo tomar una licota de 25 microlitros y la coloca en el siguiente pocillo que ya tiene 25 microlitros de diluyente + la licota que vamos a agregar y obtenemos una dilución 1 / 4
  • 9. Tomamos una licota de 25 micro/l y la trasladamos al siguiente pocitllo para obtener una dilución 1/8
  • 10. susecivamente repita el paso 9 para hacer as diluciones tanto de los controles como de las muestras. 
  • AHORA YA REALIZADAS TODAS LAS DILUCIONES APARTIR DE 1/2 HASTA 1/28 PARA HACER UNA DILUCION TENTATIVA Y PODER COMPRBAR HASTA DONDE HACE REACCION EL SUERO DEL PACIETE 
  • 11. servir la muestra de eritrocitos no sensibilizados servir en las primeras dos diluciones 1;2 y 1;4 tanto de controles y muestras
  • 12-  Tomar 25 microlitros con la pipeta y los colocar la muestra en cada uno de los pocillos
  • 13. Agitamos bien para que los eritrocitos se mezclen bien con el contenido de los pocillos
  • Recomendacion cuidar de no contaminar tanto nuestro reactivo y pocillos que están cerca
  • 14. servir los eritrocitos sensibilizados (tienen el antígeno). Se servirán desde la dilución 1/8 en adelante 
  • 15. Revolver bien con pipeteo en cada una de las diluciones
  • 16. Llevar a la incubadora y esperar 45 minutos , pero igual sera dependiendo la marca del kit que se utilizo ya que en algunos el tiempo puede ser de una hora o una hora y media dependiendo de lo que se quiera determinar
  • 17. Dar lectura a los resultados estos se van a ver en caso de que si son muestras negativas o control negativo un sedimento de eritrocitos como boton que se deposita al fondo del pocito
  • Si la muestra es positiva o el control positivo se observara como un manto en donde se verán todos los eritrocitos difuminados porque reaccionan los anticuerpos con los antígenos formando la malla y el manto eso es lo que hace que no se precipiten los eritrocitos quedando atrapados formando la malla/ manto.
  • Fin del procedimiento 
  • HEMAGLUTINACION INDIRECTA -PASIVA
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