Técnicas de Hibridación

Principio
1. Desnaturalización de cadenas complementarias
2. Únion de dos cadenas complementarias
Southern blot
1. Determina la presencia de un gen o frag. de DNA
  1. En una mezcla de ác. nucleicos prev. extraidos
2. Procedimiento
  1. Aislamiento DNA
  2. Digestión
    1. Enzimas restricción
  3. Separación
    1. Electroforesis
  4. Desnaturalización DNA
    1. Álcalis
  5. Transferencia del gel
    1. Soporte solido
      1. Capilaridad
      2. Vacío
      3. Electrotransferencia
  6. Id. por sonda marcada
    1. Hibridación
      1. Unión sonda - molecula interés
    2. Revelado: placas de rayos X
3. Aplicaciones
  1. Id. genes asociados enf. trans. genética
  2. Id. mutaciones
  3. Detección polimorfismos
Northern blot
1. RNA
  1. NO enzimas rest.
  2. Procedimiento
    1. Electroforesis
    2. Desnaturalización
    3. Transferencia
    4. Hibridación
2. Aplicaciones
  1. Estudios RNAm y su regulación
  2. Variaciones RNA en difs. condiciones experimentales
  3. Comparar condiciones clínicas normales o patológicas
Dot/slot blot
1. Aislamiento y separación ác. nucleicos
2. Aplicación directa a medio solido
  1. SIN electroforesis
    1. Fijación al vacío
      1. Molde con pocillo:
        Lineal
        Slot blot
        Punto
        Dot blot
3. Detección cualitativa y cuantitativa
  1. Diluciones seriadas de [ ] conocidas del genoma

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