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PCR (Reação em cadeia de polimerase
Descripción
Bio Mol Biologia Molecular Mapa Mental sobre PCR (Reação em cadeia de polimerase, creado por Stefany Nunes el 08/06/2016.
Sin etiquetas
biologia molecular
bio mol
Mapa Mental por
Stefany Nunes
, actualizado hace más de 1 año
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Creado por
Stefany Nunes
hace alrededor de 8 años
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Resumen del Recurso
PCR (Reação em cadeia de polimerase
Amplificação de um segmento especifico de DNA dentro de um genoma (gene ou parte dele)
Reproduzir in vitro muitas cópias de um fragmento
PRINCIPIOS BÁSICOS
Estrutura de DNA
Uso de primers c/ um grupo 3 ´OH - para adição de novos nucleotideos
Produção de fita complementar
Nucleot. dATP, dGTP, dCTP, dTTP.
Complementa o que o prime começou
Condições ionicas favoraveis
REAÇÃO DE PCR
DNA alvo
DNA polimerase
os 4 dNTP (substratos para o dna polimerase)
Primers/oligonucleotideos
Íons de Mg
Solução tampão
ETAPAS DE AMPLIFICAÇÃO
Desnaturação (melting) 94º C
Abertura de fita de DNA/ tempo não varia nessa etapa
Anelamento 52º C
Temp. varia dependendo do primer
Polimerização 72ºC
Polimerase (Taq polimerase) se liga ao iniciador - temp. não varia
25 a 25 ciclos
PRODUTO DA PCR
vVisualização em gel de agarose corado com brometo de etídeo
PROGRESSO DA PCR
Tac polimerase
Termocicladores
VANTAGENS
Execução simples e rápida
Requer quantidades de pequenas de DNA
Elevada sensibilidade
Baixo custo
LIMITAÇÕES
Falhas de amplificação
Contaminação
Amplificação inespecifica
MODALIDADES
RT-PCR - reação em cadeia da polimerase pela transcriptase reversa
Síntese de cRNA (RNA complementar) a partir de RNAm ; amplificação de RNAm
Multiplex
Utilizada para amplificação de várias regiões do DNA simultaneamente (alvos multiplos)
Visualização em gel de agarose: fragmentos com diferentes tamanhos
Nested
Aumenta a sensibilidade da reação
2 conjuntos de primers
O produto da 1ª amplificação é submetida a uma 2ª reação com outro par de primer mais especifico
Long - PCR
Para ampliificar fragmentos grandes de DNA , de até 20kb
PCR Quantitativo
determina o nivel e expressão do RNAm em celula, tecidos
PCR quantitativo em tempo real - detecção da expressão de um gene a medida que o DNA dupla fita vai sendo gerado
RNAm , cDNA, PCR quantitativo
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