CAPITULO 18 M É T O D O S D E E S T U D I O E N E C O L O G Í A M I C R O B I A N A

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Nicole Corallo
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Question Answer
Describa la estrategia de enriquecimiento subyacente al aislamiento de Azotobacter por parte de Beijerinck. ? ¿Por qué se añade sulfato (SO4 2−) a una columna de Winogradsky? ? ¿Qué es el sesgo de enriquecimiento? ¿De qué manera la dilución reduce el sesgo de enriquecimiento? V
¿En qué se diferencia el método de dilución con agar de la siembra por estrías para obtener colonias aisladas? C
¿Cómo podemos aislar una bacteria con una morfología exclusiva que está presente en un cultivo de enriquecimiento en cantidad relativamente baja? V
Qué se entiende por «alto rendimiento» en el cultivo de microorganismos? ¿Cómo ha beneficiado esto a la microbiología? V
¿En qué se diferencia la tinción de viables de colorantes como el DAPI? ? ¿Qué es un gen reportero? ? ¿Por qué es incorrecto afirmar que la GFP es un método de «tinción»? V
? ¿Qué estructura celular es la diana de las sondas fluorescentes en la FISH filogenética? ? La FISH y la CARD-FISH se pueden usar para revelar diversos datos sobre las células en la naturaleza. Explique de qué datos se trata. V
¿Qué se puede concluir de un análisis por PCR/DGGE de una muestra que produce una banda por PCR y una banda por DGGE? ¿Y si produce una banda por PCR y cuatro bandas por DGGE? ? ¿Qué resultado sorprendente se desprende de muchos estudios moleculares de hábitats naturales usando el rRNA 16S como gen diana? V
¿Qué es un filochip y qué información puede ofrecernos? ? ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la tecnología de micromatrices respecto de la secuenciación de los productos de la PCR? ? ¿Por qué, en general, los análisis de T-RFLP no capturan completamente la diversidad de los filotipos en una muestra ambiental? V
¿Qué es un metagenoma? ? ¿En qué se diferencian los métodos genómicos ambientales de los análisis ambientales de genes individuales, como los basados en análisis de genes de rRNA 16S para la caracterización de las comunidades microbianas? ? ¿Cómo se puede identificar las poblaciones celulares más activas metabólicamente usando métodos de genómica ambiental? V
¿Por qué los radioisótopos son tan útiles para medir la actividad microbiana? ? Si de pronto penetrara una gran cantidad de materia orgánica en los sedimentos, ¿cómo cambiaría esto los perfiles de nitrato y oxígeno en la Figura 18.23? V
¿Cómo puede la composición 13C/12C de una sustancia revelar su origen biológico o geológico? ? ¿Cuál es la explicación más sencilla de que los sulfuros lunares sean isotópicamente similares a los de la Tierra primordial? ? ¿Qué composición isotópica de carbono se espera que tengan los metanótrofos (bacterias que consumen metano)? V
¿Cómo se puede usar el NanoSIMS para identificar una bacteria fijadora de nitrógeno? ? ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la citometría de flujo respecto de la microscopía para caracterizar una comunidad microbiana? ? Cómo relaciona la MAR-FISH la diversidad microbiana y la actividad? V
¿Cómo se puede identificar un organismo que lleva a cabo un proceso concreto mediante el sondeo con isótopos estables? ? ¿Qué método fundamental es necesario para aplicar la genómica en células individuales? ? Si una bacteria fijadora de nitrógeno crece en presencia de 15N2, ¿su DNA será más pesado o más ligero que el de una bacteria que no fije nitrógeno? V
Citometría de flujo: técnica para contar y examinar partículas microscópicas suspendiéndolas en una corriente de fluido y haciéndolas pasar por un dispositivo de detección electrónico
Columna de Winogradsky: columna de vidrio compactada con lodo y cubierta con agua para imitar un medio acuático en el que se desarrollan diversas bacterias durante unos meses.
Cultivo de enriquecimiento: método de cultivo altamente selectivo para obtener microorganismos a partir de muestras naturales.
DAPI: colorante fluorescente inespecífico que tiñe el DNA de las células microbianas; se usa para obtener el número total de células en una muestra natural.
Ecología microbiana: estudio de la interacción de los microorganismos entre sí y con el entorno.
Electroforesis de gel en gradiente desnaturalizante (CGGE): técnica electroforética que separa fragmentos de ácidos nucleicos del mismo tamaño en función de su secuencia nucleotídica
Filotipo: uno o más organismos con la misma secuencia o secuencias relacionadas de un gen marcador filogenético.
Fraccionamiento isotópico: discriminación por parte de las enzimas en contra de los más pesados de entre todos los isótopos del carbono o el azufre, y que conlleva el enriquecimiento de los isótopos más ligeros.
Genómica ambiental (metagenómica): uso de los métodos de la genómica (secuenciación y análisis de genomas) para caracterizar comunidades microbianas naturales.
Hibridación fluorescente in situ (FISH): método que emplea un colorante fluorescente unido covalentemente a una sonda específica de ácido nucleico para identificar o rastrear organismos en el ambiente.
MAR-FISH: técnica que combina la identificación de los microorganismos con la medición de la actividad metabólica.
Metaproteómica: medición de la expresión de proteínas de toda una comunidad usando la espectrometríA de masas para asignar péptidos a las secuencias de aminoácidos codificadas por genes concretos.
Metatranscriptómica: medición de la expresión génica de toda una comunidad usando la secuenciación de RNA.
Microautorradiograf ía (MAR) medición de la captación de sustratos radiactivos mediante la observación visual de las células en una emulsión fotográfica expuesta
Microsensor: pequeño sensor o electrodo de vidrio para medir el pH o compuestos específicos como oxígeno, sulfuro de hidrógeno o nitrato introduciéndolo en un hábitat microbiano a intervalos en una escala micrométrica.
Naranja de acridina: colorante fluorescente inespecífico que se usa para teñir el DNA de las células microbianas en una muestra natural.
Nicho efectivo: variedad de entornos naturales que sustentan una especie cuando el organismo se enfrenta a factores como el límite de los recursos, la depredación y la competencia con otras especies.
Nicho fundamental: variedad de ambientes en los que una especie puede subsistir cuando no tiene los recursos limitados, como puede resultar de la competencia con otras especies.
Pinzas de láser: dispositivo para obtener cultivos axénicos atrapando ópticamente una célula individual con un haz de láser y separándola de las células circundantes hacia un medio de crecimiento estéril.
Proteína fluorescente: cualquiera de un gran grupo de proteínas que emiten fluorescencia de diferentes colores, incluida la proteína fluorescente verde, para rastrear organismos modificados genéticamente y determinar las condiciones que inducen la expresión de genes específicos.
Sesgo de enriquecimiento: problema de los cultivos de enriquecimiento en el que las especies no deseables tienden a dominar el enriquecimiento, a menudo con la consiguiente exclusión de los organismos más abundantes o ecológicamente significativos del inóculo.
Sonda de ácido nucleico: oligonucleótido, normalmente de entre diez y veinte pares de bases de longitud de secuencia complementaria con la secuencia de un ácido nucleico en un gen o un RNA diana.
Sondeo con isótopos estables (SIP): método de caracterización de un organismo que incorpora un sustrato concreto que consiste en suministrarle el sustrato marcado con 13C o 15N y aislar el DNA enriquecido con el isótopo pesado para analizar los genes
Técnica del número más probable (NMP): dilución en serie de una muestra natural para determinar la mayor dilución que permite el crecimiento.
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