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extracción del ADN
Description
pasos para la extracción del ADN del liquido amniótico
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regencia de farmacia
tecnologia
Flowchart by
Milena Herrera
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Created by
Milena Herrera
almost 3 years ago
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Flowchart nodes
Extracción del ADN del liquido amniótico
Amniotico (binary/octet-stream)
La muestra(LA) es congelada en un tubo de Eppendorf
Sacado+Del+Tubo (binary/octet-stream)
centrifuga a 7000 RPM/ 5M
Centrifuga (binary/octet-stream)
Se retira el eppendorf de la centrifuga
Se descarta el sobrenadante
Desacarte+De+Sobrenadante (binary/octet-stream)
Se obtiene el pele de células que es en donde esta el ADN
En el tubo de Eppendorf se colocan 700 microlitros de solución de lisis
Esta solución rompe la membrana celular y nuclear
mezclar en vortex, para mejor acción del buffer
Lisis (binary/octet-stream)
Vortex (binary/octet-stream)
La mezcla de lisis contiene proteinasa k
Para que actué se somete a 56°C/ 1Hora en una incubadora
Porteinas+K (binary/octet-stream)
56°C (binary/octet-stream)
Pasado el tiempo de incubación se colocan 500 microlitros de fenol cloroformo alcohol isoamílico
Con lo anterior se forman dos fases: Inferior orgánica, superior DNA
Cloroformo (binary/octet-stream)
Dos+Faces (binary/octet-stream)
Resuspender o mezclar por inmersión durante 10 minutos
Luego se centrifuga a 13.000 RPM/ 10 minutos
Resuspender (binary/octet-stream)
Mezclar+En+Centrifuga (binary/octet-stream)
Pasados los 10 minutos, podemos observar tres fases, en donde la capa del medio es la de proteínas
Retiramos por medio de una pipeta el sobrenadante donde esta el DNA y se pasa a un tubo de Eppendorf nuevo
Tresfases (binary/octet-stream)
Tubo+Tres (binary/octet-stream)
Se hace un nuevo lavado con FC AI hasta que no aparezca la fase de proteínas
Luego debemos precipitar el DNA, para esto se usa 500 microlitros de isopropanol y centrifuga
Cuando ya lo centrifugamos, se descarta el sobrenadante y en la parte inferior del tubo se observa el DNA
Luego se suspende en agua miliquiu para mantenerlo para próximos procedimientos
Precipitar (binary/octet-stream)
Mezclar+En+Centrifuga (binary/octet-stream)
Fondo+Del+Tubo (binary/octet-stream)
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