Métodos de Secuenciación del ADN

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Farmacia Mind Map on Métodos de Secuenciación del ADN, created by Eduardo de Mucha on 24/05/2018.
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Métodos de Secuenciación del ADN
  1. Sanger
    1. Uso de dideoxinucleótidos sin la terminal 3' para generar fragmentos pequeños debido a que la DNA pol no puede terminar su secuenciación sin ese fragmento terminal
    2. Maxam y Gilbert
      1. Fragmentos marcado radioactivamente que son escindidos posteriormente y se leen gracias a su radioactividad
      2. Priosecuenciación
        1. Se basa en la detección de la señal luminosa generada por una reacción quimioluminiscente, en la cual es utilizada como sustrato, el pirofosfato que se libera como resultado de la incorporación de un nucleótido a la cadena de ADN naciente.
        2. SOLiD
          1. Se basa en usar fragmentos de DNA de una biblioteca en donde se clonan estos fragmentos con emulsión de PCR donde después se juntan con una ligasa, primers y sondas con fluorescencia, estos se hibridizan y se leen
          2. Ion torrent
            1. Se usa un chip semiconductor con muchos pozos en donde se va a depositar perlas con fragmentos de DNA replicado y se van a llenar los pozos en este chip con uno de los 4 nucleótidos del DNA y al unirse estos a los fragmentos de las perlas, se liberará un ión hidrógeno y se lee este cambio de pH
            2. Illumina -Solexa
              1. Se unen adaptadores a los extremos de la muestra y esta se coloca en un portaobjetos con carriles con 2 diferentes oligonucleótidos que van a formar cadenas y luego puentes entre si entre más se replican, este proceso se le llama "cluster generation". Se eliminan las cadenas en reversa y se secuencia esto con nucleótidos con fluorócromos que serán leídos.
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