Es un conjunto de pasos a seguir para la obtención de preparados histológicos
aptos para su estudio mediante el microscopio óptico.
Obtención del material
Biopsia: consiste en tomar un
trozo de tejido de un ser vivo.
Necropsia: es el procedimiento en el cual se
extrae material de un cadáver
Autopsia: consiste en el estudio
analítico y sistemático completo.
macroscópico y microscópico de los
órganos, aparatos y sistemas de un
cadáver. Se realiza para establecer
causas de muerte
Fijación: una vez obtenido el material
que se desea estudiar por cualquiera de
los procedimientos descriptos se procede
a su fijación con lo que se evita la
destrucción o lisis celular. Es un proceso
físico — químico complejo por el cual se
mantiene a las estructuras orgánicas en el
estado más parecido al que poseían en
vida.
Deshidratación: se
coloca la muestra en
alcoholes de
concentración
creciente para
eliminar el agua que
contenga ya que la
parafina no es
miscible con agua. Se
utiliza etanol 70%,
80%, 96% y 100%.
Aclaración: son solventes que
producen transparencia en los
tejidos, además de solubilizar la
parafina. Entre ellos se encuentran.
xilol. toluol. acetona, benceno. El más
usado es el Xilol.
Inclusión en parafina: la parafina es
una mezcla de hidrocarburos
saturados que tienen diferentes
puntos de fusión. Parafina blanda
funde a 44 – 48ºC y la parafina dura a
56 – 58ºC. LA parafina se pone en
estufa de cultivo a unos grados por
encima de su punto de fusión. Se
sumerge la muestra,
Preparación del taco: se corta un trozo de parafina que
contiene la muestra en forma de pirámide truncada, de
manera tal que la misma quede sobre la base menor
Corte: se realiza mediante el uso del micrótomo. El micrótomo de
congelación permite cortar el tejido después de fijarlo por frío, congela
con dióxido de carbono y lo endurece para que luego pueda ser
cortado
Colocación sobre portaobjeto: efectuados los cortes se colocan en
agua tibia para que se extiendan y luego se recogen con un pincel y
se los extienden en el portaobjetos y se dejan secar para su
posterior coloración
Desparafinización: se debe extraer todo la
parafina del tejido y aclararlo nuevamente. Se
utiliza Xilol.
Hidratación: se debe hidratar el tejido ya que la mayoría de los
colorantes son de base acuosa. Para ello se coloca el portaobjeto en
soluciones de etanol de concentraciones decrecientes. Etanol 100%,
96%, 80%, 70% y Agua destilada