Inclusion de tejidos en parafina

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Karen Veronica  Garzon Salazar
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Inclusion de tejidos en parafina
  1. Los tejidos fijados adquieren cierta consistencia y dureza, pero no la suficiente para que, de ellos, se obtengan secciones delgadas. Estas secciones, del orden de algunas milésimas de milímetro (5 a 10 m), se conseguirán cuando los tejidos se infiltren con sustancias denominadas “de inclusión” y adquieran tal dureza que sometidos al filo de una navaja produzcan secciones, cortes o láminas sumamente delgados y transparentes
    1. ORIENTACIÓN DE TEJIDOS PARA SU INCLUSIÓN.
      1. Consideraciones generales.
        1. Estructuras tubulares.
          1. Estructuras quísticas
            1. Identificación de márgenes y superficies
              1. Los tejidos que tienen los márgenes marcados con tinta china o con colorante deben ser colocados en una forma tal que la tinta se pueda ver en el borde de la sección. Si hay secciones múltiples, estas deben ser incluidas con la tinta siempre mirando hacia el mismo lado del bloque para que las láminas queden mejor organizadas y para facilitar su estudio bajo el microscopio
                1. Superficies epiteliales.
                  1. Aquellos tejidos que tienen una superficie epitelial, como la piel, el intestino, la vesícula biliar, la vejiga urinaria y el útero, deben ser colocados en forma tal que el plano de sección pase a través de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe colocarse en la parte más alta del bloque para que así sea la última en ser cortada. El acto de llegar al epitelio al final de la moción de corte va a minimizar la presión que es causa de distorsión de la capa epitelial.
                    1. Especímenes grandes y sólidos.
                      1. Los especímenes rectangulares grandes o sólidos como el útero, la próstata, la glándula tiroides, y el tejido óseo deben ser incluidos con un ligero ángulo en relación al borde de la cuchilla. Esta comienza el corte con menos resistencia, reduciendo así la posibilidad de desplazar el tejido fuera del bloque. La vibración e inestabilidad del borde de la cuchilla o del bloque también se minimizan notablemente
                        1. Múltiples Especímenes:
                          1. Múltiples fragmentos de tejidos blandos y ganglios linfáticos deben ser colocados uno junto al otro con suficiente espacio entre ellos. Si los tejidos se colocan uno encima del otro, existe la posibilidad de que el tejido de abajo distorsione el tejido que está encima
                    2. Después de la disección, los quistes pequeños adoptan una forma de cúpula. Por lo tanto, los quistes deben ser incluidos con la superficie de corte hacia abajo para que así la cuchilla corte a través de todas las capas de la pared del quiste. Hay que asegurarse de que la cúpula no atrape burbujas de aire.
                    3. Estructuras tubulares tales como vaso deferente, venas, arterias y oviducto deben ser incluidas en una forma tal que la cuchilla corte a través de la luz tubular. La orientación debería ser tan vertical corno sea posible. La cuchilla, entonces, deberá hacer los cortes en una forma que sea perpendicular al eje longitudinal del tubo
                    4. Las secciones de tejido son incluidas perfectamente planas para asegurarse de que se obtenga una sección completa. Use la presión justa para mantener la sección plana contra la superficie del molde. Debe tenerse mucho cuidado para que después no aparezcan artefactos causados por un manejo inadecuado de las muestras de tejido
                  2. ESTACION DE INCLUSION DE TEJIDOS EN PARAFINA
                    1. La forma más sencilla es usar un molde en el que se vierte la parafina y en el que se introduce la muestra procesada y se deja enfriar para que el conjunto se solidifique. En muchos laboratorios se utiliza una estación a tal efecto.
                      1. Estas estaciones disponen de depósito de parafina líquida (600C), desde el que se puede dispensar parafina sobre el molde mediante un grifo; dispone también de una cámara donde se guardan los diferentes moldes a 600C y una placa caliente (600C) y otra fría (40C).
                        1. La dinámica es sencilla, se coloca el molde debajo del grifo dispensador de parafina y se llena con parafina líquida, se coloca la pieza y se orienta, colocando, por último, la base del casete de inclusión. Se desplaza con cuidado el conjunto encima de la placa fría para conseguir una solidificación rápida que no forme cristales y una vez solidificado se extrae el molde obteniendo un bloque listo para cortar.
                      2. ENCASTRACIÓN EN PARAFINA
                        1. Las muestras de tejidos están encastradas en bloques de parafina (o PEG) usando contenedores disponibles en plástico o porcelana, discos de aluminio, o en "botes hechos con papel". Cuando uses estos métodos, extiende una fina capa de aceite de parafina en la superficie antes de vaciar la parafina líquida para permitir que se desmonte más fácilmente el bloque de parafina.
                          1. La encastración de tejidos inhibidos con parafina se realiza más fácilmente sobre una plataforma de encastración. Esta es una superficie simple de aluminio, que tiene una de sus superficies calentadas y no la otra. Cuando está caliente, el lado calentado mantiene la parafina líquida permitiendo que el tejido pueda ser orientado
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