ELISA utilizan como marcador
una enzima y el espectrofotómetro
como sistema de detección
iImunofluorescencia utilizan como marcador un fluorocromo
y necesitan como sistema de detección el microscopio de
fluorescencia
InmunoFluorencencia
Técnica utilizada para visualizar la distribución de una
proteína o antígeno específico en células o secciones de
tejido utilizando la especificidad de los anticuerpos por su
antígeno para dirigir marcadores fluorescentes a las
biomoléculas dianas de forma específica.
Esta dividida en
IFDirenta
Se usa unión covalente previa del fluoróforo con el
anticuerpo primario, sólo requiere una única etapa de
incubación con el antígeno y una sola etapa de lavado. El
marcador fluorescente generalmente produce una
sustancia colorada o un aumento en la cantidad de luz
emitida a una longitud de onda determinada, si el antígeno
está presente. En el caso de ausencia de antígeno, no hay
unión del anticuerpo primario marcado y por lo tanto no
hay señal.
IFIndirecta
Consiste en el uso de un anticuerpo primario no
marcado que se une específicamente al antígeno
diana, y el anticuerpo secundario, que lleva el
fluoróforo, reconoce el anticuerpo primario y se
une a él. Varios anticuerpos secundarios pueden
unirse al anticuerpo primario y esto proporciona
una amplificación de la señal mediante el
aumento del número de moléculas de marcadores
fluorescentes por antígeno.
ELISA
Ensayo inmunoenzimático ampliamente
empleado en el área médica para la
cuantificación de moléculas especialmente
de aquellas que experimentan cambios en
diferentes estados como pueden ser
infecciones por bacterias, virus, hongos o
parásitos o fases activas de enfermedades
autoinmunes.
Divición
Directa
Fijación al soporte insoluble de
antígenos específicos. Lavado para eliminar los
antígenos fijados deficientemente o no fijados..
Adición de anticuerpos marcados . Lavado para
eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.
Adición de substrato
Indireta
Fijación al soporte insoluble de
antígenos específicos para los
anticuerpos objeto de estudio
Adición del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos
reaccionarán específicamente con los antígenos fijados al soporte.
Lavado.
Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima