Un cultivo celular es el conjunto de
procedimientos que hacen posible el
mantenimientos células pluricelulares en un
ambiente controlado preservando al máximo
sus características fisiológicas, bioquímicas y
genéticas
Tipos de cultivos celulares
Cultivos de
explantes
Consiste en pegar
un fragmento de
tejido a una
superficie y
nutrirlo con un
medio de cultivo
Cultivos de
órganos
Consiste en mantener un órgano
entero o parte de él con los
distintos tipos celulares presentes
diferenciados, así como la
estructura histológica y la
arquitectura del órgano
Cultivos
de
células
Se realiza a partir de suspensiones celulares que
se introducen en un recipiente adecuado junto
con un medio de cultivo y se incuban en las
condiciones óptimas para que las células crezcan
Cultivo celular primario
La suspensión celular de partida se obtiene
separando las células de un tejido por métodos
mecánicos o enzimáticos
Cultivo celular secundario
La suspensión celular se obtiene a partir d un
cultivo primario o de otro secundario,
mediante un subcultivo o "pase"
Principales
aplicaciones
Estudios de
citoxidad
Estudios de
cardiogénesis
Estudio de cualquier
aspecto relacioado
con el metabolismo
celular
Estudios con
células
madre
Virología
Inmunología
Producción
de fármacos
Producción de tejidos y
órganos funcionales en un
ambiente controlado para su
uso en injertos y traspantes
Estudios de
mutagénesis
Factores que
intervienen en
el cultivo
Soporte físico
Materiales
empleados
Tipos de
recipiente
Placas multipocillo
Placas de Petri
Frascos roux
Botellas para
incubadores tipo roller
Tratamiento
de recipientes
Medios de
cultivo
Características
fisicoquímicas
de los medios
pH
Osmolaridad
Viscosidad
Tensión superficial
Composición de
los medios de
cultivo
Tampón
Sales minerales
Glucosa
Aminácidos
Suero animal
descompementado
Suplementos orgánicos
de bajo peso moecular
Indicador Ph
Antibióticos y
antifúngicos
Condiciones
de incubación
Temperatura
Humedad
Atmósfera
gaseosa
Procedimientos
de cultivo
celular
1) Disgregación celular
3) Recuento y viabilidad celular
2) Selección de células
4) Descongelación de células
5) Siembra del cultivo
6) Mantenimiento del cultivo
7) Conservación de células
Contaminación
en los cultivos
Crecimiento de los cultivos
Formas de crecimiento
En monocapa
Consiste en que las células crecen pegadas sobre una
superficie sólida
En la fase de latencia se van pegando al soporte
En la fase exponencial proliferan formando COLONIAS CELULARES
En a fase estacionaria entran en CONFLUENCIA, estableciendo contacto entre ellas lo
que produce INHIBICIÓN POR CONTACTO
En suspensión
Consiste en mantener células que no necesitan pegarse a una superficie para crecer,
dispersas en el interior del medio de cultivo y creciendo
Curva de crecimiento
Es a representación grafica de a concentración
de células por los días de cultivo en la que se
diferencian tres fases:
Fase de latencia
Corresponde a las primeras 24
horas de evolución del cultivo, en as
que no se produce crecimiento y el
número de células permanece
contstante o disminuye ligeramente
Fase estacionaria
Sucede a partir de los 6-7 días y es la fase
en la que el número de células permanece
constante
Fase exponencial
Dura aproximadamente 6-7 días y corresponde a la fase en la
que el número de células aumenta de manera exponencial
hasta alcanzar un máximo. Al final de esta fase es el mejor
momento para realizar subcultivos
Líneas celuares
Línea celular primaria
Es aquella obtenida a partir de un CULTIVO PRIMARIO y que se mantiene en cultivo mediante pases seriados durante
un tiempo limintado
Las líneas celulares primarias tienen una vida finita entre 20 y 100 pases y después
entran en la FASE DE SENESCENCIA en la que las células van perdiendo capacidad
dividirse y el cultivo acaba muriendo
Línea celular continua
Son aquellas que se obtiene a partir de un cultivo primario y se
mantiene en cultivo por tiempo ilimitado mediante pases
seriados
Estas líneas celulares aparecen por la aparición de CÉLULAS IMORTALES, como
consecuencia de un FENÓMENO DE TRANSFORMACIÓN de las células normales,
que se puede inducir por: