Microtomía

Beschreibung

Mindmap am Microtomía, erstellt von Evelin Zambrano am 10/02/2019.
Evelin Zambrano
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Evelin Zambrano
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Zusammenfassung der Ressource

Microtomía
  1. El micrótomo es un equipo mecánico de precisión que se utiliza para realizar cortes en tejidos que han sido objeto de inclusión en parafina, siendo las secciones conseguidas de espesor micrométrico lo suficientemente delgadas para permitir su examen por el microscopio.
    1. Normalmente los micrótomos modernos permiten cortes de un espesor de 0,1 hasta 100 µm. A modo comparativo: El cabello humano tiene un espesor entre 50 y 70 µm.
      1. Los primeros micrótomos, tal como hoy en día los conocemos, se desarrollaron en 1770. Con estos se podía fijar la prueba y ajustar el grosor del corte mediante unos tornillos.
    2. La microtomía, es; en parte una técnica y en parte un arte.
      1. ¿Qué tipo de cuchillas tienen los micrótomos?
        1. Las cuchillas que utilizan los micrótomos pueden ser de tres tipos de materiales, los cuales dependen de la necesidad que el laboratorio necesite cubrir y de la finura del corte que requieran las secciones.
          1. Cuchillas de acero: Las cuchillas de acero para micrótomos son especiales para cortar secciones de tejidos blandos de animales y/o vegetales. Las cuchillas de acero pueden utilizarse en histología, corcho, madera y poliestireno expandido para microscopía de luz.
            1. Cuchillas de vidrio: Las cuchillas de vidrio para micrótomos son ideales para extraer secciones muy delgadas para microscopía de luz y electrónica.
              1. Cuchillas de diamante: Las cuchillas de diamante para micrótomos generalmente se utilizan en las industrias, pues éstas se utilizan para cortes finos de materiales duros como huesos, dientes y materia vegetal como, maderas duras, pues además son ideales para microscopía de luz como y electrónica.
              2. Tipos de micrótomos
                1. Micrótomos semiautomáticos
                  1. Los micrótomos semiautomáticos están diseñados para el corte automatizado y motorizado de muestras. Es ideal para laboratorios de análisis de rutina y de investigación en histología así como para el control de calidad en industrias.
                  2. Micrótomos automáticos
                    1. El micrótomo automático está diseñado para el corte de muestras en parafina, es fácil de operar, por lo tanto, permite al usuario poder hacer otras tareas mientras se encuentra en operación.
                    2. Criostatos o Micrótomo de congelación
                      1. Garantizan el procesamiento eficaz de las muestras, facilitando a su vez cortes rápidos, seguros y reproducibles. Las espaciosas cámaras crióstáticas tipo "opentop", todas construidas en acero inoxidable, permiten un trabajo cómodo y ofrecen amplio espacio para el almacenamiento se muestras.
                      2. Ultramicrótomo
                        1. Con los Ultramicrótomo se preparan muestras para los microscopios electrónicos de transmisión. Debido a que los preparados deben ser extremadamente finos, estos micrótomos disponen de cuchillas especiales y de un avance muy fino, que frecuentemente es accionado por dilatación térmica.
                        2. Micrótomo de deslizamiento
                          1. Estos micrótomos se componen de un sujeta-muestras fijo y una cuchilla que está fijada sobre una corredera. Para garantizar un corte estable, normalmente las correderas de los micrótomos suelen pesar bastante.
                          2. Micrótomo de oscilación
                            1. Micrótomo de rotación Universal
                              1. El micrótomo de rotación universal está diseñado para las aplicaciones de rutina y se destaca por diversas innovaciones y mejoras técnicas, entre otros un nuevo sistema de movimiento del volante que implica mayor precisión en el corte.
                                1. Cuenta con una rotación de la muestra de 180º y no necesita lubricación y mantenimiento constante, pues el volante se puede bloquear en cualquier posición, y el mango se puede bloquear en la posición más alta, lo que suele ser muy seguro para cambiar la hoja o la muestra. -Operación: Manual -Rango de espesor del corte: 0- 60 μm
                                  1. PARTES
                                    1. El panel de mandos
                                      1. Con teclas de colores y en relieve. Con la práctica, estas características permiten el manejo prácticamente ‚ciego‘ del panel permitiendo al usuario enfocar toda su atención en el corte y en recoger las muestras. El panel de mandos es ajustable en inclinación y puede ser posicionado a la izquierda o a la derecha del equipo.
                                      2. El portacuchillas
                                        1. Con protector de dedos ideal: si se usa según lo previsto, el protector integrado reduce prácticamente a cero la posibilidad de dañarse con el filo de la cuchilla. El protector de dedos puede permanecer colocado encima del filo también durante el corte.
                                        2. Inferior número de palancas de fijación
                                          1. Que en cualquier otro microtomo actualmente en el mercado aseguran facilidad de manejo.
                                          2. Amplia zona de almacenamiento
                                            1. La bandeja integrada da espacio para tener siempre a mano todas las herramientas auxiliares. Para el mantenimiento de las muestras en frío junto al equipo recomendamos la bandeja de refrigeración extraíble (accesorio opcional)
                                            2. El ajuste lateral de portacuchillas
                                              1. permite aprovechar el filo entero de la cuchilla sin tener que aflojar el mecanismo de sujeción de la misma. Esto ahorra costos, sobre todo en laboratorios que cortan grandes cantidades de bloques. Tres posiciones de encaje predefinidas (izquierda, centro, derecha) corresponden a la anchura de un típico cassette estándar.
                                        3. Micrótomos rotatorios
                                          1. Micrótomos rotatorios manuales
                                          2. Errores en microtomía Problemas y soluciones
                                            1. Pesca, Desparafinización
                                              1. BAÑO DE FLOTACIÓN
                                                1. Están constituidos por un tanque fabricado en material inoxidable, el cual tiene montado en la parte inferior del mismo un conjunto de resistencias eléctricas mediante los cuales transfieren calor a un medio como agua o aceite, que se mantiene a una temperatura preseleccionando a través de un dispositivo de control.
                                                  1. Se pone en agua a 47°C aproximadamente, se pone en un portaobjetos y se añade alcohol, gelatina sin sabor, goma para extender y deslizar el tejido, ya deslizado este se levanta y se coloca sobre una laminilla, entonces se pasa a la desparafinacion sobre una platina o estufa a más de 60°C-70°C para pasar luego a la tinción.
                                                    1. Los cortes se extienden al depositarlos sobre la superficie del líquido ex tendedor contenido en un recipiente Esto impide que se formen facetas desiguales en el filo de la denominado “baño de flotación” (éste mantiene la navaja produciéndose, con ello, un afilado deficiente. temperatura entre 40o a 45o C).
                                                      1. Las secciones se extienden aisladas o formando cintas, estas se recogen y adhieren al portaobjetos de la misma forma: en el caso que se requiere recoger los cortes aislados, extendido previamente como una cinta, deben separarse utilizando las mismas pinzas finas o agujas de disección.
                                                      2. PROCESO DE PESCA
                                                        1. Este proceso consiste en que el corte de tejido se transporta hacia el baño de flotación con agua, el cual se encuentra a una temperatura de entre 45 y 50ºC donde, gracias a las fuerzas de tensión superficial que se generan en la lámina de parafina y tejido al hacerla flotar sobre el líquido, se eliminan posibles pliegues.
                                                          1. El procedimiento para recuperar los mejores cortes del baño se denomina coloquialmente “pesca” y consiste en introducir un portaobjetos en el baño hasta tocarla sección en uno de los lados del corte.
                                                            1. Cuando empieza la adherencia de la sección sobre el cristal se extrae poco a poco el portaobjetos del baño, dejando drenar el agua por gravedad. Si la orientación o la disposición del corte no es la adecuada, éste se puede volver a reflotar y orientar.
                                                              1. Al terminar el montaje de las preparaciones vaciamos el baño y eliminamos cualquier vestigio de contaminación con papel de filtro.
                                                                1. Una vez montados los cortes sobre el porta, y antes de la tinción, las preparaciones deben ser secadas meticulosamente para evitar su desprendimiento.
                                                                  1. Estos e hace metiendo la preparación en la estufa a 60ºC durante 10/20 minutos, o a 37ºC durante 24 horas. Una temperatura elevada (valores próximos a 100ºC, como suelen hacer algunos técnicos de mayor edad) puede deteriorar de forma irreversible la mayor parte de los componentes bioquímicos y antígenos tisulares.
                                                        2. DESPARAFINACIÓN
                                                          1. Después de extender y montar el corte en una laminilla el corte debe ser secado para evitar su desprendimiento y desparafinar los cortes, la desparafinación se lleva acabo introduciendo las laminillas acomodadas en una canastilla de portaobjetos, a la estufa a una temperatura de 60ºC por 30 minutos
                                                            1. antes de colorear, porque los colorantes son hidrofílicos. Lo paso por xileno (desparafinado) y luego por concentraciones decrecientes de alcohol (rehidratación)
                                                          Zusammenfassung anzeigen Zusammenfassung ausblenden

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