UD 8. Inmounohematología y hemocompatibilidad

Introducción
1. Transfusión: procedimiento mediante el cual se pasa sangre, o alguno de sus componentes, de un donante a un receptor.
  1. Objetivos: reponer volumen sanguíneo, aumentar la Hb y la capacidad de transporte de oxígeno, corregir niveles de proteínas o otros componentes sanguíneos.
  2. Factor determinante: compatibilidad entre donante y receptor, no se produzca una reacción inmunológica entre Ag y Ac de donante-receptor.
    1. En la mb de las células sanguíneas, hay antígenos que determinan:
      1. El grupo sanguíneo: 1 o + Ag presentes en células sanguíneas, codificadas x un locus o por 2 o + genes homólogos ligados.
Grupos sanguíneos
1. Ag A y B en la superficie de los hematíes. Y en el plasma hay Ac que pueden reaccionar con ellos: A, B y AB (ABO).
  1. Ac importantes en las reacciones transfusionsles
    1. IgG - provoca la enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN)
    2. IgM - no atraviesan BHP
    3. IgA - secreciones
2. Sistemas ABO y Rh
  1. Sistema ABO
    1. Subgrupos A y B
      1. Mutaciones del gen ABO alteran eficiencia de la transferasa codificada o modifican su afinidad x el sustrato en el q actúan
        Variantes cuantitativas - menor cantidad de Ag A o B en la mb Hem
        Variantes cualitativas - anomalías estructurales antigénicas
        Subgrupos A + comunes. A y A1 80% y A2 20% / Grupo AB - subgrupos A1B y A2B
        No aglutinan con los antisueros anti-A y anti-B y en prueba celular se confunden como grupo O - detectados x discrepancias entre la prueba celular y sérica
        1 Ac (anti-B los subgrupos A débiles y anti-A los subgrupos B débiles / Grupo O 2 Ac (anti-A y anti-B)
    2. Grupo Bombay
      1. 2 alelos recesivos del gen H (hh) carecen de estereasa H, no producen H ni AgA ni AgB
        Análisis de suero aglutina con todos A, B, AB y O. Ac anti-ABO y anti-H
    3. Herencia del sistema ABO
    4. Cadenas cortas de oligosacáridos unidos a esfingolípidos de la mb Hem. Parte común de los Ag, diferencia la terminación
      1. Expresión de los Ag controlada x: gen H (Cr19) y Gen ABO (Cr9) - codifica enzimas glicotranferasa
        Transferasa H cataliza la incorporación de una L-fucosa = AgH sintetiza AgA y AgB
        Gen ABO codifica 3 alelos:
        Alelo A: xra transferasa A, cataliza la adición de un residuo N-acetilgalactosamina al AgH = AgA
        Grupo A: AgA en sup celular Hem. En suero Ac anti-B
        Alelo B: xra transferasa B, incorpora residuo D-galactosa al AgH = AgB
        Grupo B: AgB en sup celular Hem. En suero Ac anti-A
        Alelo O: xra prot sin actividad glicosiltransferasa, SIN modificación del AgH
        Grupo O: AgH en sup celular Hem. En suero Ac anti-A/anti-B
        Ac reactivos contra los Ag no presentes en los Hem propios
        Grupo AB: AgA y AgB en sup celular. En suero ni Ac anti-A/anti-B
  2. Sistema Rh
    1. Fenotipos
      1. Fenotipos D parcial
        D, carece parte del Ag (varios epítopos)
      2. Fenotipos D débil
        Hem con poco AgD,
        Respuesta débil ante antiglobulina
        Respuesta fuerte en una transfusión
        Donante Rh+ y receptor Rh-
      3. Fenotipo Rh null o nulo
        No hay Ag del sist Rh x mutación en gen RHAG produce anemia hemolítica crónica
    2. Herencia del factor Rh
    3. +50Ag: D, C, c, E y e. Rh+ y Rh - presencia o ausencia del AgD
      1. Rh+ tienen AgD en los Hem, donación solo Rh+
      2. Rh- no tienen AgD en los Hem, donación a Rh+ y Rh-
      3. AgD detectado por aglutinación directa con suero anti-D. Genotipo Cr1:
        Gen RHD: codifica AgD
        Gen RHCE: codifica Ag C, c, E y e. Formas alélicas: CE, Ce, cE y ce
        Gen RHAG: codifica glicoproteína asociada a Rh
        Ac contra Ag Rh inmunes, aparecen tras el contacto. Activos a 37ºC, no fijan complemento, disminuyen la vida media Hem y los destruyen extravascularx, EHRN. Anti-D, anti-E y Anti-c
  3. Compatibilidad
3. Otros sistemas de grupos sanguíneos
  1. Sistema Kell
    1. Ac: IgG inmnes, detectables con antiglobulina directa, poco frecuentes y clínicax significativos: reacciones hemolíticas postransfusionales, EHRN
  2. Sistema Kidd
    1. Ag: Jka y Jkb
    2. Ac: evanescentes y títulos indetectables - reacción hemolítica retardada (2º contacto)
  3. Sistema Duffy
    1. Dos alelos codominantes en el Cr1, 2 Ag: Fya y Fyb
    2. Fenotipos: étnia blanca - Fy(a+b-), Fy(a+b+), Fy(a-b+) / étnia negra - Fy(a-b-)
      1. Fya y Fyb receptores Plasmodium vivax
      2. Fy(a-b-) resistencia natural
    3. Ac: étnia negra y pacientes transfundidos
Patologías relacionadas con la hemocompatibilidad
1. Enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN)
  1. Hemólisis fetal o neonatal x paso de Ac maternos x barrera hemoplacentaria
    1. Hemolisis fetal - anemia, aumento bilirrubina, muerte
      1. Ac: IgG atraviesa placenta
      2. Anti-D y anti-Kell
      3. Ac ABO: ictericia leve
      4. Prevención: madre Rh- suministro de antiglobulina antiRh a las 28 semanas y tras el parto. Destrucción rápida de los Hem del feto en circulación materna. Tras el parto, control de signos de hemólisis en el bebé.
2. Anemias hemolíticas
  1. Anemia hemolítica autoinmune (AHAI)
    1. AHAI por auto-Ac calientes
      1. 37ºC - IgG reactivos
    2. AHAI por auto-Ac fríos
      1. < 37ºC - IgM reactivos
    3. Hemoglobinuria paroxística por frío
      1. Unión a Ag a< 37ºC - IgG. Causan hemólisis a 37ºC
    4. Diagnóstico: mediante test de Coombs directo o test directo de antiglobulina
    5. Producción Ac anti-Ag mb Hem
  2. Anemia hemolítica inducida por fármacos
    1. Diagnóstico: test de Coombs directo y solución: suprimir tto
3. Reacciones hemolíticas postransfusionales
  1. Reacción Ac del suero del receptor, con Ag de los Hem donante
  2. Reacción inmediata o retardada
  3. Según gravedad: hemólisis moderada o shock con fracaso renal
Técnicas para el estudio de la hemocompatibilidad
1. Técnicas de aglutinación
  1. Es la + utilizada para la detección de Ag Hem. Suspensión de Hem + Ac específicos para el Ag
  2. Detección de Ac: suero/plasma problema + Hem con Ag específico
2. Preparación de las muestras
  1. Preparación de una suspensión Hem
    1. Lavado con solución salina/PBS para eliminar plasma, Hem hemolizados, coágulos...
      1. Plasma/suero - ambas. Expt: Ac requieren activación del complemento con SUERO
  2. Preparación de células A, B y O
    1. Suspensiones de Hem de un grupo en concreto
3. Aglutinación en tubo y en placa
  1. Técnica de aglutinación en placa
  2. Técnica de aglutinación en microplaca
    1. Pocillos recubiertos de Ac
      1. Aglutinación - rojo uniforme
      2. No aglutinación - botón rojo fondo
    2. Visual / automatizada
  3. Técnica de aglutinación en tubo
    1. Aglutinación - botón rojo (macroagregados)
    2. No aglutinación - Hem resuspendidos en el antisuero
4. Aglutinación en columna de gel
  1. Tarjetas DG Gel
    1. Columnas de gel
      1. Aglutinación: agregados de Hem, pierden elasticidad en mb. No pasan a través de los poros del gel.
      2. No aglutinación: Hem mantienen mb intactas y atraviesan los poros del gel
    2. Tipos de tarjetas DG-Gel
  2. Separación Hem según estado de aglutinación
5. La lectura de los resultados
  1. Graduación 4+ - 0, va de más aglutinado a menos
Pruebas de hemocompatibilidad
1. Determinación del grupo ABO
  1. Técnicas de tipificación ABO
  2. Discrepancias entre las pruebas celular y sérica
    1. Discrepancias por problemas Hem
      1. AgB adquirido
      2. Glóbulos poliaglutinables
      3. Campos mixtos
      4. Ac esperados no presentes
2. Determinación del grupo Rh
  1. Determinación del AgD
  2. Determinación del genotipo del sistema Rh
3. Detección de Ac irregulares
4. Técnicas para la detección de Ac irregulares
  1. AgA débil o ausente
5. Pruebas cruzadas
  1. Prueba cruzada mayor
  2. Prueba cruzada menor
Pruebas inmunohematológicas diagnósticas
1. Pruebas de la antiglobulina
  1. Prueba de antiglobulina directa (PAD) / Test de Coombs directo
  2. Prueba de antiglobulina indirecta (PAI) / Test de Coombs indirecto

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