técnicas para el analisis e interpretacion de la informacion genetica

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metodos de investigacion de adn
andres cortes
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técnicas para el analisis e interpretacion de la informacion genetica
  1. RFLPs (Fragmentos de Restricción de Longitud Polimórfica)
    1. desarrollada por Sir Alec Jeffreys en 1985.
      1. tecnica utilizada en los estudios moleculares, y consiste en la combinacion de dos metodos basicos en el trabajo molecular
        1. en primer lugar se realiza una amplificacion por PCR del fen que queremos estudiar
          1. posteriormente se realiza la digestion del producto amplificado con enzimas de restriccion
          2. es util para detectar pequeñas inserciones en determinados fragmentos de restriccion de un gen
              1. ciertas mutaciones puntuales en un gen pueden crear nuevos sitios de restriccion o hacer desaparecer aquellos presentes en un gen normal
                1. lo que altera el patron de los fragmentos de restriccion observables
                    1. en conclusion se pueden detectar dos tipos principales de polimorfismoque pueden tener las cadenas de ADN
                      1. en el primero se encuentra el polimorfismo en el orden de las bases nitrogenadas,en la secuencia genomica,el cual puede ser facilmente identificado
                        1. en el segundo,el polimorfismo se presenta por el tamaño de los fragmentos de adn ya sea por causa de una insercion,una lesion o una duplicacion
          3. PCR
            1. fue ideada en 1989 por Kary B. Mullis
              1. el objetivo de la PCR es producir suficiente ADN de la región blanco para que pueda analizarse o usarse de alguna otra manera
                1. amplifica más de un millón de veces un ADN
              2. La técnica de PCR es un procedimiento usado para amplificar los segmentos deseados de ADN a través de la repetición de los ciclos de
                1. son tres procesos en los que se someten a unos ciclos de temperatura
                  1. desnaturalización (separación del ADN de doble cadena inducida por calor)
                    1. en este primer ciclo a una temperatura de 95 grados donde el ADN se desnaturaliza
                      1. la elongación (extensión de las secuencias cebadoras para formar una nueva copia de la secuencia deseada)
                        1. el resultado es que en cada ciclo de temperaturas se iran duplicandola cantidad de adn de nuestro fragmento ,despues de 30 ciclos encontramos que nuestroadn estara presente en un numero de dos copias
                            1. apartir de una unica copia llegaremos a mas de mil millones de copias de nuestro fragmento
                          1. El apareamiento (unión de cebadores específicos del segmento deseado a una cadena parental de ADN)
                            1. en el segundo ciclo se enfrian colocando nucleotidos y anillandolos en sus regiones correspondientes y una frase de elongacion a una temperatura de 32 grados donde la polimerasa incorpora los nucleotidos
                                1. este ciclo se repite de 25 a 35 veces donde en cada uno de ellos
                            2. se trata de una de las tecnicas de biologia molecular mas importantes que existen por su sencillez experimental y la cantidad de aplicaciones
                              1. consiste en obtener grandes cantidades de un fragmento concreto de adn a partir de un molde
                                1. para generar este proceso necesitamos una serie de componentes
                                  1. nucleotidos ,polimerasa(enzima que realiza la reaccion) y una pareja de onigonucleitidos de sean especificos en nuestra region de interes
                            3. en cuando una molecula de dna se duplica por cada ciclo de reaccion,por lo que una serie de ampliaciones se iran generando
                            4. Las STR
                              1. son secuencias cortas de ADN, con una longitud de 2 a 5 pares de bases,
                                1. son secuencias de ADN en las que un fragmento (cuyo tamaño va desde dos hasta seis pares de bases) se repite de manera consecutiva.
                                  1. La variación en el número de repeticiones, y no la secuencia repetida, crea diferentes alelos.
                                  2. Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del ADN
                                    1. Son utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de aplicaciones en el campo de la genética
                                      1. se usa estudios de poblaciones.
                                    2. conformado por un motivo repetitivo, en el cual se encuentra contenido la secuencia repetida, y dos regiones flanqueantes, las cuales se encuentran a ambos lados del motivo repetitivo.
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